目的纯化的人颅骨成骨细胞为阳性靶细胞,以牙龈成纤维细胞为吸附对照细胞从噬菌体十二肽库中筛选出能与之特异性结合的多肽,即为成骨细胞特异性识别多肽,其氨基酸序列为:VLAVPWSEPGYL。本研究意在探讨该多肽对人颅骨成骨细胞黏附及迁移作用的影响,并确定该多肽体外促进人颅骨成骨细胞迁移及黏附的最佳浓度,为该多肽的进一步研究提供实验基础。具体内容及结果如下:1.细胞黏附实验检测特异性识别多肽对人颅骨成骨细胞黏附作用的影响体外常规培养人成骨细胞,用条件培养液分别稀释成骨细胞特异性识别多肽,使其浓度分别为 10-4mol/L 组、10-5mol/L 组、10-6mol/L 组、10-7mol/L 组、10-8mol/L组,及空白对照组。分别于相应时间点(0.5h,1h,2h,4h,8h)吸弃培养基,采取体视学的方式,显微镜下计算随机视野内黏附的细胞数。每组计算6个视野区,统计每组的平均值(细胞数/mm2)进行统计学分析。结果:在此浓度范围内,成骨细胞特异性识别多肽对人颅骨成骨细胞黏附具有一定促进作用,其最佳有效作用浓度是10-5mol/L(P<0.05)。2.细胞划痕修复实验及Transwell迁移实验检测成骨细胞特异性识别多肽对人成骨细胞迁移作用的影响2.1.细胞划痕修复实验体外常规培养人颅骨成骨细胞,不含多肽的无血清培养基作为对照组,实验组分为10-4、10-5、10-6 10-7、10-8mol/L五个多肽浓度组。用消毒的2ul枪头在铺满单层细胞的六孔板底表面缓慢轻柔地划出一条笔直痕迹,分别在0,24,48小时拍照观察细胞的相对划痕愈合面积(=迁移前划痕的面积-迁移后划痕的面积),以24小时划痕愈合面积作为统计学计算标准进行统计学分析。结果:实验组各浓度组与对照组之间24h划痕愈合面积的差异均有统计学意义(F=75.87,P<0.05),与对照组及其余实验组相比,10-4mol/l与10-5mol/l组细胞划痕愈合面积均显著增加(P<0.05)2.2Transwell迁移实验体外培养人颅骨成骨细胞,实验分为六组,即空白对照组、10-4mol/L组、10-5mol/L 组、10-6mol/L 组、10-7mol/L 组、10-8mol/L 组。采用 transwell 小室(24孔,孔径8.0um,聚碳酸酯膜厚度6.5mm),上室加入1×105个/ml含1%血清的细胞悬液100ul,下室按照实验分组加入含不同浓度多肽的含30%血清培养液600ul,空白对照组加入不含多肽的含30%血清培养液600ul,72h后取出小室,对迁移至膜下细胞进行固定、染色、拍照、计数,统计学分析所获得的实验数据。结果:实验组各组细胞迁移数目均高于对照组,且差异有统计学意义(F=127.999,P<0.05)。10-4mol/l 与 10-6mol/l 浓度组间差异无统计学意义(F=0.25,P>0.05)。综上,一定浓度范围的特异性识别多肽可促进成骨细胞的黏附与迁移,且10-5mol/l浓度的促进作用最为显著。3.Transwell迁移实验检测特异性识别多肽对人牙龈成纤维细胞及人骨髓基质细胞迁移作用的影响。体外培养人牙龈成纤维细胞及人骨髓基质细胞,实验分为六组,即空白对照组、10-4mol/L 组、10-5mol/L 组、10-6mol/L 组、10-7mol/L 组、10-8mol/L 组。采用transwell小室(24孔,孔径8.0um,聚碳酸酯膜厚度6.5mm),上室加入1×105个/ml含1%血清的细胞悬液100ul,下室按照实验分组加入含不同浓度多肽的含10%血清培养液600ul,空白对照组加入不含多肽的含10%血清培养液600ul,24h后取出小室,对迁移至膜下细胞进行固定、染色、拍照、计数,获得的实验数据进行统计学分析。结果:在此浓度范围内,成骨细胞特异性识别多肽对人牙龈成纤维细胞迁移具有一定抑制作用,对人骨髓基质细胞迁移具有一定的促进作用。结论成骨细胞特异性识别多肽能够促进成骨细胞黏附及迁移。