加味消水方对恶性腹腔积液治疗作用的实验研究

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目的:观察中药加味消水方对S180腹水型小鼠用药前后腹围变化的影响,对血中Na+、K+的离子浓度和NO的浓度的影响,以及对S180腹水型小鼠腹膜淋巴孔周长、腹膜淋巴孔面积、腹膜淋巴孔密度的影响,并探讨加味消水方治疗恶性腹腔积液的作用机制。材料与方法:1.实验动物及细胞株昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重(20±2)g,6~8周龄,购于辽宁长生生物技术有限公司,动物合格证号:SCXK2010-0001。S180肉瘤细胞株(腹水型),购于辽宁中医药大学生物技术实验室,常规在体培养传代,定期无菌抽取腹水,离心弃上清加入冻存液梯度降温,-80℃深低温冰箱冻存。2.实验方法(1)S180腹水型小鼠模型建立无菌条件下取已制备好的10只S180腹水型小鼠腹水,制备成S180腹水瘤细胞悬液(瘤细胞成活率>95%,细胞浓度1×106/mL)无菌条件下注射到随机抽取的32只健康小鼠腹腔,每只小鼠注入0.2mL,10天后32只S180腹水型小鼠全部造模成功,全鼠成活,腹水齐性好。(2)动物分组及给药方法采用随机数字法,将40只小鼠中没有注射S180腹水瘤细胞悬液的8只小鼠为①空白组,其余已造模成功的32只S180腹水型小鼠随机分为4组,分别为②对照组,③西药组(顺铂),④中药组(加味消水方),⑤结合组(顺铂+加味消水方),每组8只,总共5组。灌胃剂量根据人和鼠给药剂量换算,公式计算出各组给药剂量。空白组:每日予生理盐水0.5mL/只灌胃;对照组:每日予生理盐水0.5mL/只灌胃;西药组(顺铂):每日予生理盐水0.5mL/只灌胃;中药组(加味消水方):每日予加味消水方0.5mL/只灌胃;结合组(顺铂+加味消水方):每日予加味消水方0.5mL/只灌胃。实验第1日与第7日,西药组(顺铂)、结合组(顺铂+加味消水方)给予配置好的顺铂0.2ml/只腹腔内注射(10mg顺铂溶解于17.4ml生理盐水);空白组、对照组、中药组(加味消水方)予生理盐水0.2ml/只腹腔内注射。实验周期为14天,全部小鼠未见死亡。(3)检测指标①检测S180腹水型小鼠的腹围②检测S180腹水型小鼠血Na+离子的浓度③检测S+180腹水型小鼠血K离子的浓度④检测S180腹水型小鼠血NO的浓度⑤检测S180腹水型小鼠腹膜淋巴孔的周长、面积、密度结果:1.加味消水方对S180腹水型小鼠腹围的影响西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)对S180腹水型小鼠的腹水量均有控制作用。与空白组比较,对照组、西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)及结合组(顺铂+加味消水方)的腹围差值明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)的腹围差值明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与西药组(顺铂)比较,结合组(顺铂+加味消水方)的腹围差值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与中药组(加味消水方)比较,结合组(顺铂+加味消水方)的腹围差值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。其中结合组(顺铂+加味消水方)对小鼠的腹围控制作用更明显。2.加味消水方对S180腹水型小鼠血中Na+、K+离子浓度变化的影响实验结果显示:与空白组比较,对照组、西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)及结合组(顺铂+加味消水方)的Na+、K+离子浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)的Na+、K+离子浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05);与西药组(顺铂)比较,中药组(加味消水方)的K+离子浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中药组(加味消水方)比较,结合组(顺铂+加味消水方)的K+离子浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。其中结合组(顺铂+加味消水方)对小鼠血中Na+、K+离子的浓度降低作用更明显。3.加味消水方对S180腹水型小鼠血中NO浓度变化影响实验结果显示:与空白组比较,对照组、西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)及结合组(顺铂+加味消水方)的NO浓度明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)的NO浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);与西药组(顺铂)比较,中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)的NO浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。其中结合组(顺铂+加味消水方)对小鼠血中NO浓度的升高作用更明显。4.加味消水方对S180腹水型小鼠腹膜淋巴孔的周长、面积及分布密度变化的影响实验结果显示:与空白组比较,对照组、西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)及结合组(顺铂+加味消水方)的周长、面积及分布密度明显增大,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,西药组(顺铂)、中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)的周长、面积及分布密度增大,差异有统计学意义(P<0.05);与西药组(顺铂)比较,中药组(加味消水方)、结合组(顺铂+加味消水方)的周长、面积及分布密度增大,差异有统计学意义(P<0.05)。其中结合组(顺铂+加味消水方)对小鼠腹膜淋巴孔的周长、面积及分布密度增大更明显。结论:1.加味消水方对S180腹水型小鼠用药前后腹围变化明显降低,说明加味消水方有消腹水利尿的作用,对缓解小鼠的腹水症状有较好的效果。2.加味消水方能够降低S180腹水型小鼠血中Na+、K+的离子浓度,减轻水钠潴留,达到消腹水的作用。3.加味消水方能够增加S180腹水型小鼠血中NO的浓度,从而促进腹膜腔淋巴的开放,达到消腹水的目的。4.加味消水方能够明显促进S180腹水型小鼠腹膜淋巴孔的开放,使腹膜淋巴孔的面积、周长增大,腹膜淋巴孔的分布密度增加。
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