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目的:1.研究E3泛素连接酶MKRN1在不同病理分型结肠癌细胞中表达差异及MKRN1是否通过影响SNIP1、p53表达发挥作用;2.探讨阿帕替尼是否通过MKRN1/p53/NF-κB通路对结直肠癌细胞发挥杀伤作用及结直肠癌细胞是否通过p53对阿帕替尼产生耐药。方法:第一部分:1.以Western Blot实验探讨结肠上皮正常细胞CCD-18Co、Dukes A型结肠癌细胞HCT116、Dukes B型结肠癌细胞HT29、Dukes C型结肠癌细胞HCT15和RKO中的MKRN1蛋白表达差异;2.以CCK-8法检测HT29、HCT116、HCT15细胞的增殖活力;克隆形成实验检测集落形成能力、Transwell细胞迁移实验检测迁移能力;3.实时荧光定量PCR和Western Blot实验检测MKRN1、SNIP1、p53的m RNA和蛋白表达。第二部分:1.Western Blot实验检测HCT116中p53的敲除效率;2.CCK-8法检测阿帕替尼对HCT116及p53敲除的HCT116细胞的增殖活力的影响,Annexin V-APC/PI法检测凋亡率;3.实时荧光定量PCR法检测阿帕替尼对HCT116及p53敲除的HCT116细胞的MKRN1、Caspase-3、NF-κB p65的m RNA影响;Western Blot检测其蛋白的表达。结果:第一部分:1.MKRN1在结肠正常细胞与肿瘤细胞间存在表达差异。MKRN1在CCD-18Co中基本无表达,在HCT116和HT29中高表达、在RKO和HT15中低表达,且MKRN1在HT29中的表达量高于HCT116。2.CCK-8结果显示,细胞增殖活力HT29>HCT116>HCT15(P<0.001)。3.集落克隆形成实验结果显示,HT29的集落形成能力>HCT116>HCT15(P<0.001)。4.Transwell迁移实验结果显示,HCT15的迁移能力>HT29、HCT116(P<0.001),但HT29、HCT116发生迁移的细胞数没有统计学差异。5.实时荧光定量PCR实验结果显示,MKRN1与SNIP1、p53的m RNA表达有相关性。6.Western Blot实验结果显示,MKRN1与SNIP1、p53的蛋白表达有相关性。第二部分:1.敲除p53基因后,Western Blot实验检测不到HCT116细胞的p53蛋白表达,p53敲除成功。2.CCK-8结果显示,阿帕替尼对HCT116及p53敲除的HCT116细胞均有抑制作用,呈时间、剂量依赖关系,敲除p53后结肠癌细胞对阿帕替尼耐药。3.流式细胞术结果显示,阿帕替尼可促进HCT116及p53敲除的HCT116细胞的凋亡,细胞凋亡率随药物浓度增加而增加(P<0.01),敲除p53后阿帕替尼对细胞的促凋亡作用降低。4.实时荧光定量PCR结果显示,阿帕替尼处理后,HCT116及p53敲除的HCT116细胞的NF-κB p65、Caspase-3 m RNA表达均增加,HCT116的表达>p53敲除的HCT116细胞(P<0.05);两种细胞的MKRN1 m RNA表达水平均降低。5.Western Blot结果显示,阿帕替尼处理后HCT116细胞的p53蛋白表达降低(P<0.01);两种细胞的MKRN1蛋白表达均降低;Caspase-3蛋白表达均增加,且Caspase-3在HCT116的表达>p53敲除型HCT116细胞的表达(P<0.01);HCT116细胞的NF-κB p65蛋白表达随阿帕替尼剂量的增加逐渐降低(P<0.01),但p53敲除型HCT116细胞的NF-κB p65蛋白表达逐渐增加(P<0.01)。结论:1.MKRN1在HT29、HCT116细胞中高表达,MKRN1高表达与肿瘤细胞增殖有相关;2.MKRN1在HCT15、RKO结肠癌细胞中低表达,MKRN1低表达与肿瘤细胞迁移能力有相关;3.MKRN1可能通过影响SNIP1、p53的表达,对肿瘤细胞发挥调控;4.阿帕替尼通过降低MKRN1、p53表达并抑制NF-κB通路激活而对结肠癌产生杀伤,敲除p53基因导致结肠癌细胞对阿帕替尼敏感性降低。