老年人细菌性肺炎是严重危害老年人健康的常见病、多发病，具有发病率高、死亡率高的特点。近年来，随着对Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)的逐渐研究，发现TLR4在介导革兰氏阴性细菌内毒素，即脂多糖(lipopolyaccharide，LPS)所引起的免疫反应中起到了极其重要的作用。因此，本课题以老龄大鼠为实验对象，研究肺炎克雷伯杆菌肺炎模型大鼠肺组织炎症介质的变化及TLR4信号通路的异常，以揭示毒素清颗粒治疗肺脏损伤的作用机制，为临床应用提供依据。 目的：观察肺组织细胞因子及TLR4、NF-κB表达在老龄大鼠肺炎克雷伯杆菌肺炎时的变化，揭示肺炎克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠肺脏损伤的特点及分子生物学机制，评价中药复方毒素清颗粒的保护作用及作用机制，为其临床应用提供依据。 方法：SD青年大鼠(5～6月龄)25只，老龄大鼠(20～22月龄)50只，均为清洁级，雄性。按体重随机分组，青年大鼠分为对照组和模型组，青年对照组10只，青年模型组15只，于造模前3天及取材前一天灌胃生理盐水，每日1次，造模48h后取材。老龄大鼠分为对照组、模型组、洛美沙星组、毒素清组，其中老龄模型组20只，其余每组各10只。对照组和模型组处理同青年大鼠；洛美沙星组、毒素清组，造模前3天及取材前一天灌胃，给药剂量按动物体型系数比率换算剂量(洛美沙星：40mg·kg-1·d-1，毒素清：5.7g·kg-1·d-1)。肺炎模型采用气管捅管法复制，造模后48h取材。测定造模后24h、48h外周血白细胞数和中性粒细胞比率；测定腹主动脉血血气分析PaO2、PaCO2；光镜、电镜下观察肺组织病理形态学改变；采用免疫组织化学技术检测肺脏中IL-1、IL-6、TNF-α、NF-κB和TLR4的表达水平；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肺脏TLR4mRNA的表达。 结果： 1.支气管肺泡灌洗液(BALF)菌属鉴定结果示：均检出肺炎克雷伯杆菌，确定为肺炎克雷伯杆菌肺炎。 2.外周血白细胞计数和中性粒细胞比率变化：青年模型组、老龄模型组24h、48h白细胞数和中性粒细胞比率均分别较青年对照组、老龄对照组升高显著(P<0.01)；与老龄模型组比较，毒素清组和洛美沙星组24h、48h白细胞数、中性粒细胞比率降低显著(P<0.01)；两药物组之间无显著差异(P>0.05)。 3.动脉血氧分压和二氧化碳分压变化：青年模型组和老龄模型组大鼠动脉血PaO2降低和PaCO2升高分别较青年对照组和老龄对照组显著(P<0.01，P<0.05)；且老龄模型组较青年模型组PaO2降低和PaCO2升高显著(P<0.05)；与老龄模型组比较，洛美沙星组PaO2升高和毒素清组PaCO2降低、PaO2升高均显著(P<0.01)；毒素清组PaCO2降低较洛美沙星组显著(P<0.05)。 4.肺组织含水量：青年模型组、老龄模型组肺组织含水量分别较青年对照组、老龄对照组增高显著(P<0.05，P<0.01)，其中老龄模型较青年模型升高显著(P<0.05)；与老龄模型组比较，毒素清组和洛美沙星组肺组织含水量降低显著(P<0.05)。 5.肺组织病理改变及损伤分级比较5.1普通病理形态学观察：青年对照组为正常肺组织，老龄对照组肺组织可见肺泡上皮有退行性改变；青年模型组肺组织可见充血、水肿；老龄模型组肺泡上皮有退行性改变，见有纤维增生，有少部分被破坏，各级支气管慢性炎症明显，其充血、水肿较青年模型组严重。与老龄模型组比较，毒素清和洛美沙星组病理损伤改善明显。 5.2电镜观察：青年对照组肺泡Ⅱ型细胞游离面有短小的微绒毛，胞质富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体，板层小体丰富。肺泡隔毛细血管密集而连续。老龄对照组肺泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛呈细长的指状突起，微绒毛间和表面覆盖有肺表面活性物质。Ⅱ型上皮细胞胞浆内有大量的板层小体和线粒体，板层小体胞核结构清晰，肺泡隔毛细血管轻度水肿，肺泡扩大。青年模型组和老龄模型组肺泡Ⅱ型细胞质板层小体明显减少，细胞表面微绒毛显著减少，粗面内质网脱颗粒现象严重，细胞和周围有炎性坏死组织，成纤维细胞及其周边合成的胶原纤维增多，嗜中性粒细胞核碲裂。线粒体的嵴和膜大部分消失，可见到不完整的高尔基复合体，而以老龄模型组微绒毛脱落、上皮细胞变性更为明显。毒素清组和洛美沙星组微绒毛、板层小体数量轻度减少，线粒体的嵴和膜部分消失，粗面内质网轻度脱颗粒。 5.3肺脏损伤病理分级比较：青年模型组、老龄模型组肺脏病理损伤分别较青年对照组、老龄对照组严重(P<0.01)；老龄对照组较青年对照组病理损伤严重；与老龄模型组比较，洛美沙星组和毒素清组病理损伤明显减轻(P<0.01)。 6.各组大鼠肺脏细胞因子的改变6.1肺组织IL-1、IL-6、TNF-α表达的变化：青年模型组、老龄模型组大鼠肺组织IL-1、IL-6、TNF-α的阳性细胞数及平均光密度分别较青年对照组、老龄对照组增高显著(P<0.01)；老龄模型组IL-1的阳性细胞数较青年模型组增高显著(P<0.01)；与老龄模型组比较，毒素清组和洛美沙星组IL-1、TNF-α的阳性细胞数及平均光密度降低显著(P<0.05或P<0.01)；洛美沙星组IL-6的阳性细胞数降低显著(P<0.01)；毒素清组IL-1的阳性细胞数较洛美沙星组降低显著(P<0.01)。 6.2肺组织NF-κB和TLR4表达的变化：青年模型组和老龄模型组大鼠肺组织NF-κB、TLR4的阳性细胞数及平均光密度分别较青年对照组和老龄对照组升高显著(P<0.01)；老龄对照组、老龄模型组NF-κB的阳性细胞数、TLR4的平均光密度分别较青年对照组、青年模型组增高显著(P<0.01，P<0.05)；与老龄模型组比较，毒素清组和洛美沙星组NF-κB、TLR4的平均光密度均降低显著(P<0.01)；毒素清组较洛美沙星组NF-κB的阳性细胞数降低显著(P<0.01)。 7.肺组织TLR4mRNA的表达：青年模型组、老龄模型组TLR4mRNA的表达分别较青年对照组、老龄对照组显著增强(P<0.05、P<0.01)；与老龄模型组比较，毒素清组和洛美沙星组TLR4的表达降低显著(P<0.01、P<0.05)；毒素清组较洛美沙星组大鼠肺组织TLR4的表达有降低趋势(P>0.05)。 结论： 1.老年肺炎的肺脏损伤较青年严重，其病理变化可能与增龄因素有关。 2.肺炎的发生机制涉及IL-1、IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB的共同参与，老年肺炎肺脏损伤严重的机制可能与TLR4、NF-κB的表达增强和信号转导通路的激活，从而使炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α在肺脏的水平增强有关。 3.毒素清颗粒对老年克雷伯杆菌肺炎肺脏损伤具有较好的保护作用。 4.毒素清颗粒对克雷伯杆菌肺炎肺脏保护作用机制可能与其下调TLR4、NF-κB的表达，阻抑TLR4、NF-κB的炎症信号转导通路有关，以抑制炎性介质IL-1、IL-6、TNF-α的释放，从而降低肺脏炎症损伤。