目的：体外建立稳定的三维皮肤(即全层皮肤)创面模型；联合多学科的技术与方法证明创面收集液对表皮干细胞的增殖和分化有促进作用。　　 方法：通过组织工程学手段建立三维皮肤等价物的冻伤模型,以收集的成年Wistar大鼠背部全层皮肤创面渗出液为刺激因子,选择1、3、7、14、21天时相收集标本,进行β1整合素、α6整合素、K19抗体的免疫组化染色,观察并分析抗体表达阳性细胞的分布情况及表达强度。　　 结果：(1)通过组织工程学手段,以表皮干细胞为种子细胞,成纤维细胞-鼠尾胶原凝胶为真皮替代物,模拟在体的培养条件,实现了稳定的三维皮肤创面模型的建立。(2)无创面组、创面收集液+创面组、创面组的特异性抗体免疫组化图像比对显示,皮肤创面的愈合过程中,创缘附近出现了散在的抗体染色阳性细胞,尤集中于邻近创面区。(3)无创面组抗体染色阳性细胞的分布与数量在不同时相区别不大,差异无显著性(P>0.05)；冻伤后,以创面收集液为刺激因子的实验组和无创面收集液干预组之间对比,在伤后1天,抗体表达阳性细胞数量相当,差异无显著性(P>0.05)；冻伤后3天、7天、14天、21天不同时相的免疫组化结果比对,刺激因子干预组的表皮干细胞的特异性抗体阳性表达均要强于非干预组,差异有显著性(P<0.01)。　　 结论：离体三维皮肤创面愈合过程中表皮干细胞有异位现象；全层皮肤创面收集液在创面愈合过程中,对表皮干细胞的增殖和分化有促进作用；本研究结果将令人们深刻认识创面愈合的机制与特性,为加速创面愈合及研发理想的创面促愈药物,提供重要的理论基础。