青钱柳黄酮和皂甙化合物同步提取及纯化技术研究

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青钱柳(Cyclocarya paliurus(Batal) IIjinskaja)是我国独有的单种属植物,为我国特有的珍稀树种,是国家重点保护的濒危植物之一,属三类保护植物。其根、枝、叶均可入药,具有明显的降血糖和血压、减肥、抗肿瘤、抗衰老、抗过敏、清热解暑、提高人体免疫力、促进新陈代谢等多种功效。研究表明,这些生理活性与青钱柳中所含的黄酮、三萜以及多糖等活性成分密切相关。目前,国内外对青钱柳的研究主要集中在药理功能及活性物质的分离鉴定方面,对其活性物质的提取、纯化并未进行系统的研究,尤其是对黄酮和皂甙类物质同步提取、纯化的研究尚未见报道。本文对青钱柳黄酮和皂甙类化合物含量的测定、同步提取和纯化工艺进行了系统研究,并对青钱柳鲜叶原料和青钱柳茶的主要成分的做了比较研究,为青钱柳及其活性成分的有效利用和综合开发提供理论基础。主要内容及相关研究结果如下:1、建立了青钱柳中总黄酮和总皂甙类化合物含量的双波长分光光度法测定方法。黄酮含量的测定方法是采用三氯化铝显色,分别以波长410nm和470nm作为检测波长和参比波长,以两波长处的吸光度值差△A对浓度C(mg/ml)进行回归分析建立的回归方程为C=0.856 7ΔA+0.004; R~2=0.9991,,研究表明,该方法测定黄酮含量的线性相关性、稳定性、重现性、精确度及回收率均较好,可作为青钱柳黄酮的含量测定方法加以应用。皂甙含量测定方法是采用香草醛、冰醋酸、高氯酸显色,分别以波长555 nm和590nm作为检测波长和参比波长,以两波长处的吸光度值差△A对浓度C(mg/ml)进行回归分析建立的回归方程为:C=10.449ΔA+0.0059; R~2=0.9979。研究表明,该方法适合青钱柳皂甙类化合物的初步定量检测。2、优化了青钱柳黄酮和皂甙同步提取条件,获得最佳提取工艺参数。采用乙醇水溶液作为提取溶剂的最佳工艺参数为:乙醇浓度为70%,乙醇30倍体积用量,时间为4h,提取两次,90℃水浴。该条件下的黄酮提取率可达3.055%,皂甙提取率为4.791%。3、以洗脱率作为考察指标,建立了X-5大孔树脂乙醇洗脱对青钱柳黄酮和皂甙同步纯化的工艺条件。通过比较研究X-5、D101、NKA-9、AB-8四种大孔树脂对黄酮和皂甙吸附和解吸效果影响的考察,选择了X-5树脂对青钱柳黄酮和皂甙进行纯化。最终确定X-5树脂纯化工艺的条件为:青钱柳粗提液浓度3.00~5.00 mg/mL,以流速2.0BV/h上样后用水洗至流出液透明,然后用4 BV,80%的乙醇,以3.0 BV/h的流速同步洗脱黄酮和皂甙。该条件下纯化黄酮和皂甙的洗脱率分别为98.806%和90.072%。4、对湖南省绥宁县青钱柳鲜叶和青钱柳加工叶中的黄酮和皂甙含量的差异性进行了研究探讨。结果显示,该地区同一季节的成熟叶中黄酮和皂甙含量是所有供试样品中含量最高的;相同嫩度的加工叶比较,野生青钱柳中两物质的含量均高于人工栽培青钱柳中的含量;相同季节人工栽培的不同生育年龄的鲜叶比较,其二者含量呈先增加后降低的变化趋势。
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