泼尼松龙的微生物转化研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ruru0077
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泼尼松龙(11β,17α,21-三羟基孕甾-1,4-二烯-3,20-酮)是一种重要的甾体化合物,以泼尼松龙为前体物质经化学合成法可以制得曲安奈德(Triamcinolone)、布地奈德(Budesonide)、环索奈德(Ciclesonide)和地索奈德(Desonide)等奈德类药物,这四种药物为治疗哮喘病的主要药物,市场潜力巨大。但上述药物的化学合成方法均有步骤复杂、副产物较多,成本高等缺点,对工业化生产带来较多不便,因此研究泼尼松龙的微生物转化十分必要。本论文选用4株链霉菌为泼尼松龙的主要转化菌株,对菌株的转化能力、泼尼松龙的微生物转化工艺、分离提纯方法等进行研究,主要内容及成果如下:1.通过紫外扫描确定底物吸收波长为245nm,根据底物和产物的特性对TLC和HPLC检测条件进行优化,确定底物和产物的定性定量分析方法。2.以WM-3和WM-4为出发菌株,得到相同的泼尼松龙转化产物WMFP。以WM-4为研究对象,考察碳氮源、接种时间、底物浓度及添加时间等条件对转化的影响,结果表明:种子培养基在24h达到对数期,其后接入发酵培养基可有效抵制底物对菌株的抗性,底物浓度在2.5mg/mL、添加时间在24h,以乙醇作为助溶剂,同时结合诱变作用以及底物抗性筛选,转化率可达到70%以上。柱层析法分离纯化产物WMFP,通过质谱和核磁进行鉴定,其结构为11β,17α,20,21-四羟基孕甾-1,4-二烯-3-酮,分子量为362。3.以WM-1和WM-2为出发菌株,得到产物均为16α羟基泼尼松龙和WMFP。以WM-1为研究对象,考察碳氮源、底物浓度及添加时间、溶氧量以及助溶剂等因素对转化的影响,结果显示底物浓度在2mg/mL,底物添加时间在26h,以聚乙二醇为助溶剂结合诱变作用,16α羟基泼尼松龙的转化率可达到5%。4.以泼尼松龙为底物经微生物发酵生产WMFP的方法文献中未见报道。
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