愤怒郁怒大鼠中缝背核GABABR1介导GABA调节下丘脑5-HT水平的机制研究

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目的探讨愤怒、郁怒模型大鼠中缝背核GABABR1介导GABA调节下丘脑5-HT水平的作用机制及其异同,为应用调肝方药有效防治怒诱发的相关病证提供科学依据。方法社会隔离结合居住入侵法制备愤怒、郁怒大鼠模型,以攻击行为测试为主,辅以旷场实验和糖水实验区分愤怒、郁怒大鼠模型,并以白香丹胶囊、舒郁胶囊分别干预;在此基础上,ELISA检测调肝方药不同用药天数(0、1、3、5、7天)后下丘脑5-HT含量及中缝背核GABA含量;免疫荧光双标技术检测中缝背核5-HT与GABABR1共表达情况及荧光强度,免疫电镜双标技术检测中缝背核5-HT和GABABR1的突触联系;脑立体定位注射GABABR1特异性激动剂Baclofen、特异性抑制剂CGP35348后ELISA检测下丘脑5-HT含量。结果(1)造模后,愤怒、郁怒大鼠分别表现出明显高低不同的混合攻击行为得分及旷场总路程。调肝方药干预后,愤药组攻击行为得分明显低于愤模组(P<0.05),郁药组高于郁模组(P<0.05),且两用药组均恢复至对照组水平(P>0.05),旷场总路程也表现出同样的趋势。(2)模型组大鼠下丘脑5-HT含量均明显低于正常组(P<0.05),而中缝背核GABA含量则显著高于正常组(P<0.05),且两模型组之间也有显著性差异(P<0.05)。调肝方药干预后,随着用药天数增加,用药组大鼠下丘脑5-HT含量逐渐升高,至第7天明显高于模型大鼠(P<0.05),恢复至正常水平(P>0.05);相反,用药组大鼠中缝背核GABA含量逐渐下降,至第7天明显低于模型大鼠(P<0.05),恢复至正常水平(P>0.05)。(3)免疫荧光双标检测结果显示,各组大鼠中缝背核5-HT能神经元与GABABR1可出现共表达。荧光半定量检测发现:与对照组相比,两模型组大鼠中缝背核GABABR1表达明显升高(P<0.05),且郁模组高于愤模组(P<0.05),调肝方药干预后则显著降低(P<0.05),恢复到正常水平(P>0.05);相反,两模型组大鼠中缝背核5-HT表达明显低于正常对照组(P<0.05),调肝方药干预后则显著升高(P<0.05),恢复到正常水平(P>0.05)。(4)免疫电镜结果显示,各组大鼠免疫电镜切片上可见GABABR1颗粒位于含5-HT颗粒的突触膜上。(5)以注射生理盐水作为对照,中缝背核注射GABABR1特异性激动剂Baclofen后,各组大鼠下丘脑5-HT含量均显著性降低(P<0.05);相反,注射GABABR1特异性抑制剂CGP35348后,各组大鼠下丘脑5-HT含量则显著升高(P<0.05)。结论社会隔离结合居住入侵法制备愤怒、郁怒大鼠模型稳定可靠。愤怒、郁怒作为怒的两种表现形式,均可导致中缝背核GABA含量和GABABR1表达异常升高,进而GABABR1介导GABA抑制中缝背核5-HT能神经元产生5-HT,导致下丘脑5-HT含量显著性减少;相关调肝方药亦可作用于上述靶点,有效纠正病变,这是愤怒、郁怒的相同点。中缝背核GABABR1表达异常增多的程度不同可介导GABA调节中缝背核5-HT能神经元产生5-HT减少的程度也不同,这是愤怒与郁怒的不同点。
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