论文部分内容阅读
目的:通过蛋白质组学研究比较食管癌发生发展过程中的差异蛋白,分析这些差异蛋白生物学信息,并采用体外培养细胞株探讨Wnt经典信号通路中Wnt2,GSK3β,β-catenin三个关键蛋白在食管鳞状细胞癌及正常食管上皮组织在体外的表达及意义。方法:采用同位素标记相对和绝对定量技术(i TRAQ)对新鲜的食管癌和癌旁组织分别标记,通过比较二者的差异蛋白分析其生物学信息并筛选重要的信号传导通路;培养正常食管上皮细胞株HEEC和食管癌细胞株EC109,通过划痕实验对比二株细胞株的生物侵袭性,用逆转录PCR及蛋白印迹方法分别在基因水平和蛋白水平检测Wnt2,GSK3β,β-catenin在HEEC及EC109细胞株中的表达。结果:(1)采用iTRAQ方法检测得到食管癌与癌旁组织共有431个差异蛋白,共同上调蛋白和共同下调蛋白数量分别为72和57。(2)用划痕实验方法测得食管癌细胞株生物侵袭性比正常食管上皮细胞株强。(3)用逆转录PCR实验方法检测的Wnt2,GSK3β,β-catenin结果与蛋白印迹实验方法检测的结果相一致。(4)Wnt2在食管鳞状细胞癌株中呈高表达。GSK3β在正常食管上皮细胞株中表达高于食管鳞状细胞癌株,而β-catenin在正常食管上皮细胞株中高表达。结论:iTRAQ技术为食管癌筛选出大量的差异蛋白,为临床寻找食管癌生物标记物提供了可靠的资源;Wnt经典信号通路中Wnt2与GSK3β均参与了食管鳞状细胞癌的发生与发展过程。β-catenin对食管癌如何作用尚未知。为进一步明确Wnt经典信号通路对食管鳞状细胞癌的作用影响,需做进一步的研究分析。