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目的:本课题以大枣多糖提取物(JPS)和丹皮酚胂衍生物2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯-4-胂酸(R2)为药物,研究其单独及联合应用体内外抗肿瘤作用,并观察这两种药物之间是否存在协同效应。
方法:(1)水浴浸渍大枣,提取物经负压浓缩后,用乙醇沉淀获得粗糖,再经过脱脂、脱蛋白、脱色等初步纯化后,进一步运用DEAE-纤维素进行多糖分离。
(2)在体外通过MTT法检测JPS和R2单独及联合应用对人肝癌细胞株HepG-2增殖与活力的影响;用细胞形态学和流式细胞术检测细胞的凋亡及其周期的变化。
(3)在体内以S180荷瘤鼠模型来评估抗肿瘤效应。采用单独给药和联合给药的方式治疗肿瘤,疗程结束后,处死小鼠并称体重,摘取眼球吸取血液用于计数白细胞和血小板;剥离肿瘤、心、肝、肾、脾和胸腺,称重后计算肿瘤抑瘤率,脾指数、胸腺指数和肝指数。病理切片检查药物对肿瘤和内脏的损伤,电镜分析部分肿瘤凋亡或坏死状况。
结果:(1)大枣粗糖用石油醚脱脂、酶-三氯乙酸-正丁醇联合应用脱蛋白、H2O2脱色和乙醇沉淀。采用DEAE-纤维素层析,蒸馏水和0~1.0mol/L的乙酸钠分别洗脱分离,获得大枣中性多糖(JPS-N) 和酸性多糖(JPS-A)两大组分。
(2)JPS和R2单独或联合应用均可明显抑制HepG-2细胞增殖,且具有浓度-时间效应;JPS和R2单独或联合作用均可诱导细胞凋亡,但联合应用未见细胞凋亡有显著性增加。
(3) 以小鼠的体重变化、肝脏指数、脾指数、胸腺指数及外周血白细胞和血小板数来观察指标,观察药物对荷瘤小鼠的毒副作用。结果显示,JPS对上述各项指标均有显著增加作用,而且JPS可对抗R2引起的白细胞和血小板减少现象。病理切片检查发现,JPS和R2均可导致肿瘤细胞坏死,但R2对小鼠肝、肾有较大的毒副作用。电镜检查部分肿瘤组织,发现肿瘤细胞皱缩、染色质浓缩或在核边缘形成不规则的新月型和胞膜完整的凋亡小体。协同实验表明JPS能明显改善R2治疗荷瘤鼠引起的不良影响。
结论:研究显示JPS和R2体内外均具有较好的抗肿瘤效果,可能与免疫调节和诱导凋亡有关,且存在时间-浓度效应;JPS与R2具有一定的协同抗肿瘤功效。