滞育激素调控因子的分离纯化与N-乙基马来酰亚胺敏感因子的克隆及表达分析

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本文对滞育激素调控因子的分离纯化与N-乙基马来酰亚胺敏感因子的克隆及表达进行了分析。文章利用RACE技术,克隆得到了全长为2.4kb的棉铃虫NSFcDNA。基因组Southernblot分析表明该基因为单拷贝。Northernblot显示NSFnmRNA在神经组织尤其是脑中高表达。原位杂交技术(insituhybridization)进一步显示了NSFmRNA在脑、SG、胸神经节(TG)以及腹神经节(AG)中都有明显的表达,说明NSF可能广泛地参与了神经系统中多种蛋白类物质的转运和释放过程。利用荧光免疫细胞化学技术(Fluorescenceimmunocytochemistry,FICC),发现了NSF与两种重要的昆虫神经肽,促前胸腺激素释放激素(PTTH)和滞育激素(DH)共定位,间接证明了NSF与PTTH和DH的运输和释放有关。用RT-PCR和WesternBlot方法,分别从mRNA和蛋白水平上观察到了非滞育和滞育个体脑和SG复合体中NSF的时相表达差异,同时也观察到PTTH和DH在mRNA和蛋白水平上的变化趋势与NSF有密切的相关。NSF在发育过程中的高表达暗示了它可能是通过转运和释放特定的神经肽而在昆虫发育过程中起着重要的促进作用。
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