论文部分内容阅读
目的:检测染料木黄酮对于C57BL6小鼠的颈总动脉组织中p-Akt,p-NF-kB和VCAM-1蛋白表达水平的影响,并探究染料木黄酮对于C57BL6小鼠颈总动脉粥样硬化的预防及治疗作用。方法:（1）雄性6周龄C57BL6小鼠50只,体质量17-22 g,普通饲料喂养1周后随机将C57BL6小鼠分为5组:低浓度染料木黄酮组10只C57BL6小鼠实施(左颈总动脉套管+高脂饲料+染料木黄酮5 mg·kg-1·d-1)、高浓度染料木黄酮组10只C57BL6小鼠(左颈总动脉套管+高脂饲料+染料木黄酮20 mg·kg-1·d-1)、阿托伐他汀钙组10只C57BL6小鼠(左颈总动脉套管+高脂饲料+阿托伐他汀钙10 mg·kg-1·d-1)及模型组10只C57BL6小鼠（左颈总动脉套管+高脂饲料+生理盐水）、空白对照组10只C57BL6小鼠（普通饲料+生理盐水）。药品均为灌胃处理,每周测量体重并记录相关数据。（2）至实验进行到第15周,小鼠经腹腔注射10%的水合氯醛溶液麻醉,股动脉取血,所取的小鼠血液经过3000 r/min离心15 min后将血清取于1.0毫升的EP管当中,送至青岛大学附属医学院检验科检测血液中LDL-C,HDL-C,TC和TG的含量。（3）小鼠取血后处死,用玻璃分针分离并取出套管侧颈总动脉,组织经过4%的多聚甲醛固定后做石蜡切片用于HE染色,冰冻切片用于油红O染色,光学显微镜观察每一组小鼠颈总动脉血管内壁结构的变化情况。（4）提取各组小鼠套管侧颈总动脉组织中的总蛋白和核蛋白,应用western blot检测每组小鼠颈总动脉组织中p-Akt,Akt,p-NF-kB,NF-kB和VCAM-1蛋白的相对表达量。（5）从-20℃冰箱取出6μm的冰冻切片做免疫荧光染色,用免疫荧光显微镜观察p-Akt,NF-kB p65蛋白的表达量和位置变化。结果:（1）各组小鼠体重之间差别无统计学意义（p>0.05）。空白对照组,高浓度染料木黄酮组和阿托伐他汀钙组的血脂水平明显低于模型组。（2）组织病理学观察表明,除模型组外,其余各组颈动脉结构均无斑块形成,颈动脉壁较薄,且脂滴含量较少。（3）免疫蛋白质印迹分析显示,模型组当中p-Akt,p-NF-kB和VCAM-1的蛋白表达水平显著高于染料木黄酮组、阿托伐他汀钙组和空白对照组中相应蛋白的表达水平。（4）免疫荧光检测分析显示,模型组p-Akt的表达水平显著高于染料木黄酮组、阿托伐他汀钙组和空白对照组中p-Akt的表达水平（p<0.05）。高剂量染料木黄酮组小鼠颈动脉的细胞核中NF-kB p65含量较少且显著低于模型组,其表达水平与阿托伐他汀组的表达水平相近（p<0.05）。结论:在小鼠颈总动脉粥样硬化疾病的发生发展过程中,染料木黄酮通过下调p-Akt,p-NF-kB和VCAM-1的表达,进而减轻小鼠动脉粥样硬化的形成。