目的：1本课题以苹果树枝多酚类成分为研究对象，首先从苹果树枝中提取分离精制得到苹果树枝多酚类成分的化学部位，并对其降血糖活性进行初步验证，明确苹果树枝多酚类成分是苹果树枝降血糖活性的有效部位。2对筛选出的苹果树枝多酚类成分活性部位进行系统分离。以期获得苹果树枝多酚类成分降血糖功效的药效物质基础。3对苹果树枝多酚类成分的质量控制方法进行初步研究，包括总多酚及总黄酮的含量测定。4对苹果树枝多酚类成分的降血糖功效进行深入研究。包括其对血糖、胆固醇、甘油三酯、口服葡萄糖、淀粉、蔗糖耐受量的影响，以及对胰岛RIN-m5f β细胞的作用等。方法：1苹果树枝原料用5倍量的体积分数为80%乙醇水溶液于90℃回流提取2次，每次30min。采用816型大孔树脂为柱色谱填料，以水、40%乙醇、60%乙醇、95%乙醇为洗脱溶剂，将苹果树枝粗提物分离精制为不同的化学部分。利用Folin-Ciocalteu比色法测定各个化学部分的总多酚含量，筛选出多酚含量最高的化学部分。采用小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病ICR小鼠模型对筛选出的化学部分的降血糖活性进行初步验证。2采用多种色谱法如硅胶柱色谱、开放ODS柱色谱、制备型反相HPLC等分离方法对筛选出的苹果树枝多酚类化学部分进行系统分离。通过共薄层、理化性质和EI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、COSY等谱学方法对分离得到的单体成分的平面结构及立体结构进行确定。3通过UV法对筛选出的苹果树枝多酚类化学部分的质量控制方法进行研究。选用简便、快速、易行的NaNO2-Al（NO3）3显色法对其总黄酮含量进行测定。4建立多次小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠模型，并随机分组，给予苹果树枝多酚类成分一周后尾静脉取血，利用葡萄糖试剂盒、甘油三酯和总胆固醇试剂盒测定其对血糖、甘油三酯和总胆固醇的影响。测定糖尿病小鼠灌服葡萄糖、蔗糖和淀粉0、1及2h血糖值，与模型对照组、阳性对照组比较，确定其对糖尿病小鼠的糖耐量的影响。另外采MTT法测定苹果树枝多酚类成分对胰岛RIN-m5f β细胞的影响。结果：1实验结果显示水部分、40%乙醇部分、60%乙醇部分、95%乙醇部分总多酚含量依次为3774.5g/g、4320.9g/g、6918.6g/g、1305.5g/g，其中60%乙醇部分总多酚含量最高。另外苹果树枝提取物60%乙醇部分在给药2h后对小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠具有很好的降血糖作用。2共从苹果树枝60%乙醇部分分离并鉴定了8个多酚类单体化合物，分别为：phloridzin，(1)4-hydroxybenzoic acid，(2) protocatechuic acid methylester，(3) cinnamic acid，(4)6-methoxy quercetin，(5)6-methoxy quercetin-3-O-α-L-rhamno–pyranoside，(6) phloretin (7) quercetin，(8)其中化合物2、3、5、6为首次从该植物中分离得到。3本实验建立的NaNO2-Al（NO3）3显色法平均回收率为102.78%，平均相对标准偏差为1.68%，所用方法简便、快速、易行，精密度考察、稳定性考察、重现性试验及线性关系考察均符合要求，可用于苹果树枝60%乙醇部分的总黄酮的质量控制。实验结果显示，苹果树枝60%乙醇部分的总黄酮含量高达15.78mg/g。NaNO2-Al(NO3)3显色法的原理是在碱性条件下，络合反应发生在黄酮B环的3’,4’-邻二酚羟基部位，一些不带邻二酚羟基的黄酮类化合物（如根皮苷、根皮素等）不能通过此方法检测到，因此在苹果树枝60%乙醇部分中总黄酮的含量可能更高。4运用糖尿病动物模型对苹果树枝提取物60%乙醇部分的降血糖功效进行了进一步研究。结果表明，苹果树枝提取物在给药一段时间后，对小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病ICR小鼠有良好的降血糖作用；苹果树枝提取物给药一周后能够明显降低小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病ICR小鼠血液中甘油三脂的含量，而且能够加快小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病ICR小鼠体内葡萄糖的代谢，从而增加糖耐受量。口服葡萄糖、蔗糖、淀粉耐量实验同样证明了苹果树枝提取物具有良好的降血糖作用。苹果树枝提取物60%乙醇部分在高剂量时降血糖作用明显，低剂量时无作用，且口服葡萄糖、蔗糖、淀粉耐量实验也没有抑制血糖升高。同时通过体外实验，发现苹果树枝提取物60%乙醇部分具有促进胰岛RIN-m5f β细胞增殖的作用，且有浓度依赖性。结论：本课题的研究为苹果树枝的质量控制及开发提供了一定的理论和实验基础。