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猪繁殖与呼吸综合征是一种严重危害养猪业的传染病，它主要引起妊娠母猪的流产、死胎、弱仔、木乃伊及仔猪的呼吸道疾病，给我国的养殖业造成了巨大的经济损失。PRRSV基因组快速的变化以及免疫抑制特性，为PRRSV的防控带来了巨大的困难。本试验旨在对华南地区PRRSV的NSP2和ORF5基因变化及感染情况进行跟踪调查，为了初步了解PRRSV的变异情况，对纯化出的XF株与国内外分离株进行基因序列比对；同时利用原核载体表达了ORF7基因，并纯化该重组蛋白免疫小白鼠制备单克隆抗体，为该病的分子流行情况及防治诊断提供参考。1.华南地区PRRSV NSP2与ORF5基因的遗传变异分析为了了解华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株遗传变异及感染的情况，本实验采用RT-PCR对分离到的14株PRRSV的NSP2和ORF5基因进行了扩增，采用CLUSTAL W软件DNAstar软件的MegAlign对测得序列进行序列比对和遗传进化分析，结果发现NSP2和ORF5核苷酸的同源性分别在83.3％-100％和95％-100％，而与国内外分离到的毒株NSP2和核苷酸同源性分别在69.5％-99.3％和62.9％-99％，NSP2进化分析发现14株均为PRRSV均为美洲型毒株，并且和国内流行毒株JXA1在同一分支上，表明华南地区流行的毒株仍为PRRSV变异株。2.猪蓝耳病病毒XF株的克隆纯化及基因组测序分析为了进一步研究最近华南地区流行的PRRSV毒株的特性，本试验利用蚀斑纯化出XF毒株，并用primier5.0设计引物进行RT-PCR扩增各个目的片段并将其拼接，得到PRRSV XF株的全基因序列；然后将其与国内外分离的毒株进行核苷酸序列对比分析。结果发现，其与国内外分离株核苷酸及疫苗株同源性在60.3％-99.2％之间；其中与JXA1株相似性最高为99.2％，与EuroPRRSV相似性最低仅为60.3％，与三株广东株的相似性在99.0％-99.1％之间，与RespPRRS MLV的相似性为89.4％，与CH-1a的相似性为94.9％。这表明XF株与JXA1株亲缘关系最近，仍然为变异株。3．PRRSV的N蛋白的原核表达以及单克隆抗体制备本实验室利用蚀斑纯化出来的毒株成功克隆出N蛋白基因，并将其成功连接到pET-32α(+)上，并将其转化到BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达，可溶性分析表明原核表达的融合蛋白以可溶性形式存在，western-bloting检测证明有良好的抗原性。利用Ni2+一NTA树脂亲和层析纯化后的融合蛋白经三次免疫和一次加强免疫Balb/c小鼠后进行融合，经过三次亚克隆和间接ELISA的筛选，最终获得了1株单抗(B7D3)，间接免疫荧光表明该单与PRRSV N蛋白发生特异性反应。ELISA鉴定测得血清多抗效价为1：8000，B7D3Ig亚型为IgG2b。最终我们成功制备了单克隆抗体，为后续利用单克隆抗体对N蛋白抗原的诊断奠定基础。