随着转基因技术日趋成熟，许多转基因作物已大规模商品化，产品通过贸易进入国际市场。国际上很多转基因作物，如：大豆、玉米、油菜籽，已通过商业化进入我国市场。为了加强对转基因产品的安全管理，2001年5月23日，国务院发布了《农业转基因生物安全管理条例》，2002年1月5日，农业部发布了《农业转基因生物安全评价管理办法》、《农业转基因生物进口安全管理办法》和《农业转基因生物标识管理办法》三个配套规章，要求对农业转基因生物在进入市场前进行安全性评价，对进入流通领域的农业转基因生物要进行标识管理。 1 转基因产品安全性评价的内容 转基因农作物的安全性问题已引起世界范围內的广泛关注。有关国际组织，如：经济发展合作组织(OECD)、国际食品生物技术委员会(IFBC)、联合国粮农组织／世界卫生组织(FAO／WHO)、国际生命科学会(ILSI)都在着手建立转基因产品的安全性评价体系。 转基因产品的安全性评价內容包括：(1)对转基因背景资料要进行详细审查；(2)转基因产品检测方法的建立；(3)抗抗生素标记基因的安全性问题；(4)毒理学问题；(5)营养问题；(6)转基因作物对生态环境影响的风险。 对转基因产品进行安全性评价，最重要的一项工作就是对转基因产品进行检测，它是准确进行安全性评价的基础。转基因产品的检测包括定性检测和定量检测。常用的方法有：普通PCR方法、实时荧光PCR方法、基因芯片方法、蛋白质检测方法。 2 本研究建立了转基因产品的定性PCR筛选检测方法 目前已批准商业化种植的转基因作物除含有目的基因外，95％以上的转基因作物还含有CaMV 35S启动子，或Nos终止子，或NPTⅡ基因。所以可以通过检测这些基因可以初步判断样品是否为转基因产品。本研究建立了CaMV 35S启动子、Nos终止予和NPTⅡ基因的筛选检测方法。主要商业化转基因产品标准化检测技术的建立与应用3本研究建立了转基因油菜的定性PCR检测方法 本研究选择磷酸烯醉式丙酮酸欺化酶(Phos曲oenolp”旧vate一carboxylase，尸曰.烈护乙盯‘)基因的特异序列片段作为油莱内源参照基因，通过GenBank的Blast功能，对尸石3.尸石尸C公s。基因、正义检测引物、反义检测引物、PCR产物的序列特异性进行了理论分析，并采用大豆、玉米、水稻、小麦、拟南芥菜、棉花、番茄等作物作为对照进行了实验研究，证明P曰.尸E尸C劝‘。基因可以作为油莱的内源参照基因. 转基因杭草甘麟油莱是目前世界上少数几个不含〔公初甲乃S启动子、入乞‘终止子和拟尸TII基因的商业化品种之一本研究通过:(1)比较只材F万S启动子和只材F了4s启动子的基因序列;(2)比较杭草甘麟油菜RT73中转入的修饰的CP4扭尹习呀基因和杭草甘麟大豆40一3一2中转入的农杆菌cP4.百尸S尸S基因的核普酸序列和表达的孰基酸序列;(3)比较修饰的Ga￥基因和 GOX基因的核替酸序列和表达的孰基酸序列，建立了转基因杭草甘麟油莱中外源的只材F刃S启动子、修饰的CP4.五尸义巧基因、修饰的G以丫基因的检测方法. 由于在进行转基因操作时，外源基因插入到作物基因组是随机的，也就是说，外源基因插入位点处两旁的作物基因组序列是特异的.本研究通过热力学不对称交错pCR(Thermal^symmetrie Inte印laced PeR，认IL一pcR)测定出转基因杭草甘麟RT73品系外源基因插入位点处只材F3绍启动于附近的油莱基因组序列，根据油莱基因组序列设计一个引物，根据FMV 355启动子序列设计另一个引物，建立了RT73品系的品系特异定性PCR检测方法.这种方法所检测的PCR产物既包含了作物基因组序列，又包含了外源基因的启动子序列，是高度特异的，并且也排除了由于植物花椰莱花叶病毒感染等因素所导致的假阳性结果. 本研究还建立了抗草丁麟油菜中外源的刀“(PAT)基因、刀口rnas。基因、刀口叮左护基因的定性PCR检测方法.4本研究建立了转签因玉米、大豆和棉花的定性PCR检测方法 本研究建立了玉米和大豆内源特异基因2及业乃和Lectin的特异检测方法和转基因玉米M0N810、Bt176、几5和转基因大豆40一3一2的品系特异性检测方法.同时建立了转基因抗虫保铃棉的常规PCR和实时荧光PCR定性检测方法.5本研究建立了转基因油菜籽RT73的定t PCR检测方法 根据转基因抗草甘麟油莱中的外源基因GO比尸和内源参照基因尸五污一刀护C公。设计引物和几qMan荧光探针，使用定量PCR仪对油莱籽中转基因杭草甘麟油莱籽的含童进行了定童检测研究，建立了转基因抗草甘麟油菜籽参照样品G以丫和尸石J.月护G盯e中文摘要基因之间的Ct值之差与样品中转基因杭草甘麟油菜籽含量百分比之间的标准曲线和线性回归方程，并对未知样品进行了检测.6本研究建立了转基因玉米Bt176的定量PCR检测方法 根据转基因Bt176玉米中的外源基因c尽例向和内源参照基因Zein设计引物和几qMan荧光探针，使用定童PcR仪对玉米粉中Bt176玉米的含童进行了定童检测研究，建立了Bt176玉米参照样品C勺喇向和zein之间的Ct值之差与样品中Bll76玉米含量百分比之间的标准曲线和线性回归方程，并对未知样品进行T检测.7本研究建立了转基因大豆40一3一2的定量PCR检测方法 根据?