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目的：本研究将体外合成的晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)与人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts，HGFs)共培养，观察AGEs对HGFs增殖及表达基质金属蛋白酶-1(matrix matello proteinase-1，MMP-1)和基质金属蛋白酶-8(matrix matello proteinase-8，MMP-8)的影响，探讨AGEs加重糖尿病性牙周炎的可能机制。
方法：①采用酶消化一组织块法进行HGFs原代培养，倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。取第3代HGFs绘制生长曲线并用SABC法进行波形丝蛋白和角蛋白染色以鉴定细胞来源。体外合成晚期糖基化终末产物修饰的人血清白蛋白(advanced glycation endproducts-modified human serum albumin，AGE-HSA)。将制备好的AGE-HSA用荧光光谱法进行鉴定，同时测定其内毒素的含量。以含2％FBS的DMEM稀释成实验所需不同浓度。②取第4代生长良好的HGFs，胰酶消化后以5×104个/ml等量接种于96孔板。当细胞长至相互融合时，分别与0、0.5、5、50、100、200μg/mlAGE-HSA及50μg/mlHSA共培养。在培养的第24、48、72h，用MTT法测定细胞增殖情况并计算细胞抑制率。③取第4代生长良好的HGFs，胰酶消化后以5×104个/ml等量接种于96孔培养板中。当细胞长至相互融合时，分别加入0、0.5、5、50、100μg/mlAGE-HSA及50μg/mlHSA共培养24、48、72h后，收集各组细胞上清液，3000r/min，20min以去除细胞残渣，酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法检测中MMP-1及MMP-8的蛋白水平；提取各组细胞的总RNA，实时定量逆转录聚合酶链式反应(real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，RTQ-PCR)测定MMP-1及MMP-8的RNA表达。
结果：①HGFs最早在第5d从组织块中爬出，大多呈梭形，胞浆丰满，核仁清晰。一般13～20d长满瓶底，可进行传代。生长曲线符合HGFs生长特点。制备的AGE-HSA样本为棕褐色，荧光值为110U/mg蛋白，而HSA对照样本为2.21U/mg蛋白。以上所有样本经内毒索含量测定，均＜10pg/ml。蛋白分析仪测得AGE-HSA浓度是2.5mg/ml；②MTT结果为：AGE-HSA与HGFs复合培养时，AGE-HSA各浓度组OD值均低于对照组，并且同一时间的实验组OD值随着浓度增加逐渐降低。孵育初期200μg/ml首先表现出与对照组的显著差异；而随着培养时间的延长，各浓度组均显示出与对照组的显著差异(p＜0.05)，且高浓度200μg/ml组与低浓度0.5μg/ml组均表现出与其它各浓度组间的统计学差异(p＜0.05)，表明AGE-HSA对HGFs抑制作用随其浓度升高和时间延长而增强；③ELISA数据显示：各浓度组MMP-1合成量随时间变化逐渐增高。100μg/mlAGE-HSA组HGFs中MMP-1的合成量在培养初期(24小时)即明显高于对照组(p＜0.05)。至72小时，100μg/ml浓度组不仅与对照组显示出差异，而且与最低浓度0.5μg/ml组有统计学差别(p＜0.05)；不同浓度组在不同时间诱导HGFs表达MMP-8水平无统计学差异；④RTQ-PCR结果表明：HGFs与各浓度AGE-HSA共培养后，AGE-HSA可明显促进其MMP-1mRNA合成(p＜0.05)，MMP-1水平与AGE-HSA浓度成依赖关系；本实验中各组MMP-8mRNA表达均为阴性。
结论：①AGEs可抑制HGFs增殖影响牙周组织修复能力；②AGEs可提高HGFs的MMP-1表达水平介导胶原降解；③在本实验研究条件下，不同浓度AGEs无法诱导HGFs表达MMP-8。