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背景和目的慢性乙型肝炎(简称慢性乙肝)是由乙肝病毒(HBV)引起的,以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病,30%患者可转化为肝硬化或肝癌,成为严重威胁人类健康的世界性疾病,也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种传染病,在我国中医治疗慢性肝病已有2000多年历史。中医药治疗慢性乙肝是据“证”分“型”而治,慢性乙肝中医证候是否判断准确,是中医药治疗有效性的关键。证候客观化一直是中医药现代化研究的热点,一些专家认为中医证候在一定的结构或功能层次上必然有其特定的微观物质基础。证候客观化研究者开始着手于应用系统生物学技术,在遵循中医整体观的特色基础上,深入探讨证候微观物质基础,目前在中医证候蛋白组学研究相关文献较少,目前采用代表国际最新的蛋白组学定量分析技术,比如itraq等技术的研究慢性乙肝相关证型的文献很少,本实验计划利用细胞因子抗体芯片技术(AAH-CYT-G3)和itraq技术研究慢性乙肝证侯差异蛋白组学特点,以揭示各证型间差异蛋白的数量,上调和下调,功能及通路的差异。方法1.利用蛋白芯片技术---细胞因子抗体芯片(AAH-CYT-G3),初步发现差异蛋白的表达,芯片结果采用GenePix4000B进行扫描,用软件GenePix Pro6.0读取原始数据,对数据进行处理,2.同位素标记的相对和绝对定量(iTRAQ-4plex)结合液相色谱和质谱串联(LC-MS/MS)的蛋白质组学定量分析技术,对慢性乙肝证候差异蛋白组学进行对比研究,然后通过westen-blot进行验证。结果分析采用生物信息学分析技术如Go功能分类与富集分析、Pathway分析以发现差异蛋白的表达特点、功能分类及定位。结果细胞因子抗体芯片部分：脾胃湿热组和正常组的差异蛋白是MCP-1,两组相比MCP-1上调,肝胆湿热和肝郁脾虚两组相比较有差异性的细胞因子为IGF-I、 MCSF、MCP-1、SCF、I-309,两者相比MCP-1下调,肝胆湿热组和脾胃湿热组相比,成有差异的细胞因子是IGF-I、SCF, MCP-1、SDF-1,两者相比下调明显的有MCP-1,肝胆湿热组和正常组相比较有差异性的细胞因子为IGF-I、MCSF、 MCP-1、I-309,两者相比下调明显的有MCP-1,其余各组间相比较无差异的细胞因子。Itraq部分：基于同位素标记的相对和绝对定量(iTRAQ-4plex)结合液相色谱和质谱串联(LC-MS/MS)1.蛋白裂解有效,充分,蛋白分布均匀,连续。2.质谱鉴定定量结果存在蛋白质501个,可定量的有491个,唯一肽段3920条,3.肝郁脾虚证和肝胆湿热证比较上调的蛋白有59个,下调的蛋白有64个,肝郁脾虚证和脾胃湿热证比较上调的蛋白32个,下调的蛋白有188个,肝郁脾虚证和健康人组比较上调的蛋白68个,下调的蛋白有95个,脾胃湿热证与肝胆湿热证比较上调的蛋白有189个,下调的蛋白有21个,脾胃湿热证与健康人组比较上调的蛋白有144个,下调的蛋白有39个,健康人组与肝胆湿热证比较上调的蛋白有149个,下调的蛋白有72个；4.从KEGG分析得到的各组间均有差别的通路,各组间有显著性意义的通路是hsa04145(吞噬)hsa00480(谷胱甘肽代谢通路)hsa04514(细胞粘附分子通路)等5.从蛋白的功能分析来看,各组间均有差异蛋白的不同功能特点,6.本实验采用蛋白印迹法验证三个差异蛋白,结果可以看到与差异蛋白表达相符的趋势,但并未完全吻合。结论在慢性乙肝中医证型客观化研究中,采用先进的分子生物学方法比如芯片技术和差异蛋白质组学itraq方法进行研究是可行的,尤其后者能够分析出不同证型间的蛋白、蛋白功能及通路的差异特点,有可能成为揭示出中医证候的微观物质基础.