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目的 生存素（survivin）是新近发现的IAP家族独特成员，生存素基因定位于17q25染色体，生存素在正常人的胎盘和胸腺组织中有微弱表达，在其他正常组织中几乎都检测不到。生存素在近乎所有的常见恶性肿瘤组织及白血病中都有过量表达，生存素的表达提示患者预后不良。ATRA能诱导白血病NB4细胞分化，并能下调NB4细胞生存素蛋白的表达，但在此过程中生存素蛋白表达部位的变化尚未见报道。As2O3能诱导NB4细胞凋亡，但As2O3对生存素蛋白的调节作用亦未见报道。Caspase-9和caspase-3是内源性凋亡通路中两种蛋白，研究表明生存素在不同的过程中可能通过直接或间接抑制caspase-9和（或）caspase-3蛋白的活性发挥抗凋亡作用，但生存素蛋白在白血病NB4细胞分化及凋亡过程中，与caspase-9和caspase-3蛋白表达变化的关系尚未见报道。 我们通过观察在ATRA诱导NB4细胞分化及As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中，生存素、caspase-9和caspase-3蛋白表达的变化，以探讨ATRA和As2O3对生存素蛋白表达的影响，生存素蛋白在白血病细胞分化及凋亡过程中的作用并浅探生存素的作用机理。 方法 一、细胞培养 人急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞由Muto教授提供。于含有10％小牛血清和12u／ml庆大霉素的RPMI 1640，于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中进行传代培养，所有实验均采用对数生长期细胞。 二、主要试剂 三氧化二砷（As2O3）购自哈尔滨伊达药业公司，全反式维甲酸（ATRA）、碘化丙啶（PI）、核糖核酸酶（RNAase）、硝基蓝四唑（NBT）、佛波酯（TPA）均购于Sigma公司，RPMI 1640购于GIBCO BRL USA，胎牛血清购自于天津血研所。 三、细胞增殖的测定 采用台盼蓝拒染法，计算不同药物、不同浓度下细胞生存率。 四、细胞凋亡的检测 1、细胞形态学检测:瑞士一姬姆萨染色，观察细胞形态改变。 2、流式细胞仪检测细胞周期阻滞及细胞凋亡百分比。 五、细胞分化的检测 1、细胞形态学检测:瑞士一姬姆萨染色，观察细胞形态改变。 2、NBT还原试验:计数200个细胞，计算NBT阳性百分比。 六、生存素、easpase一和easpase一3蛋白的检测 用免疫组织化学检测生存素、casPase一和caspase一蛋白的表达。 七、统计学分析 采用两组均数t检验。结果 止、ATRA对NB4细胞的影响 1、ATRA抑制NB4细胞增殖 不同浓度的ATRA以时间、剂量依赖的方式抑制NB4细胞增殖，72小时IC50为1 .71林M。 2、ATRA诱导NB4细胞分化 1林M ATRA作用于NB4细胞4天，显示出一定程度的成熟粒细胞的特征。1林M ATRA作用于NB4细胞4、6天，NBT还原试验阳性细胞百分率分别为35 .2%、72.6%。 3、ATRA对NB4细胞中生存素、caspase一和caspase一蛋白表达的影响 ATRA作用于NB4细胞3石天时，NB4细胞核中生存素蛋白表达为阴性，胞浆中持续呈阳性表达。1林M ATRA作用于NB4细胞24小时后，easpase一和easpase一蛋白的表达同对照比明显上调。 二、AsZ 03对NB4细胞的影响 l、AsZ 03抑制NB4细胞增殖 不同浓度的AsZ 03以时间、剂量依赖的方式抑制NB4细胞增殖，72小时IC50为0.53林M。 2、A气03诱导NB4细胞细胞周期阻滞及凋亡 1.5礴帆O，作用于NB4细胞24小时后，N刀4细胞出现细胞周期阻滞形态学变化，72小时可见明显凋亡形态学变化。流式细胞仪细胞周期解析显示，1 .5礴人气仇作用NB4细胞24小时出现几/M期阻滞，阻滞率为21 .5%，72小时细胞凋亡率为30.4%。 3、A凡仇对NB4细胞中生存素、挑p愁祀一和姗脚峨乃蛋白表达的影响 1 .5卜MA气仇作用NB4细胞24小时月名小时后，生存素蛋白表达均为100%，作用72小时后生存素蛋白表达下调为61 .6%（P<0.05）。 1.5林M AsZ几作用于N刃4细胞24小时后，馏p巴记一和c班甲ase一蛋白的表达同对照比明显上调。结论 1、ATRA和AsZ仇能抑制NB4细胞增殖。 2、ATRA可诱导NB4细胞分化尸A肠仇可诱导NB4细胞凋亡。 3、ATRA和AsZ几诱导NB4细胞分化及凋亡过程中，生存素蛋白可能是通过上调的caspase一casp。咒一蛋白发挥抗分化及抗凋亡作用二