目的：观察自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)静脉输入后在荷Heps肝癌小鼠体内的分布规律；光动力疗法(photodynamic therapy，PDT)是否促进静脉输入的NK细胞在肿瘤组织内聚集；观察联合NK细胞后PDT对移植瘤的抑制作用及对宿主抗肿瘤免疫效应的影响，探讨PDT联合静脉输入的NK细胞治疗小鼠Heps肝癌的疗效和机制，为肝癌光免疫治疗(photoimmunotherpy，PIT)的可行性提供实验依据。　　方法：诱导扩增KM小鼠脾细胞来源的NK细胞，培养11天后收集NK细胞，同时以4，‘6-二脒基-2-苯基吲哚(4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)染色液(50ug/ml)混匀标记1小时。KM小鼠皮下接种Heps肝癌细胞建立小鼠移植瘤模型，接种后12d，选取皮下移植瘤直径在0.8～1.2cm的小鼠128只，随机分为对照组、光动力组(PDT组)、细胞组(NK组)和光免疫组(PIT组)，32只/组。对照组：小鼠经尾静脉输入生理盐水0.2ml/只；PDT组：小鼠尾静脉注射光敏剂多替泊芬20mg/kg后24小时行PDT激光照射。照光前腹腔内注射盐酸氯胺酮100mg/kg麻醉，8％硫化钠肿瘤局部脱毛，小鼠侧卧于照射板上，红光照射肿瘤局部，连续照射15min，功率密度为200mW/cm2，能量密度为180J/cm2；NK组：小鼠尾静脉输注DAPI标记浓度为8×106/ml的NK细胞，0.2ml/只；PIT组：上述PD-T照光处理后即刻小鼠尾静脉输注与NK组相同数量的NK细胞。(1)自治疗当日起，隔日测量四组小鼠肿瘤长、短径，计算治疗后肿瘤体积变化，计算治疗后16d各治疗组抑瘤率；(2)记录各组小鼠接种肿瘤至其死亡的时间，计算平均生存时间；(3)治疗后1d、2d、4d、6d、8d，NK组和PIT组处死小鼠后快速摘取肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织，制作细胞印片，荧光显微镜下观察标记细胞在上述脏器的分布情况；(4)治疗后2d观察苏木素-伊红(hematoxylin-esosin，HE)染色的瘤组织病理学改变；(5)治疗后1d、2d、4d、6d，摘除小鼠眼球取血以流式细胞仪检测外周血NK细胞含量变化；(6)治疗后12h、1d、2d、4d、6d测定小鼠外周血T细胞亚群(CD4+T细胞、CD8+T细胞)变化；(7)治疗后6d乳酸脱氢酶(lactate dehydr-ogenase，LDH)释放法检测小鼠脾细胞杀伤活性；(8)治疗后12h、1d、2d、4d、6d、12d通过双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent ass-ay，EL-ISA)，检测干扰素(interferon，IFN)-γ的水平变化；(9)取治疗后2d各组小鼠肿瘤组织切片，分别应用Bcl-2抗体、Bax抗体抗体，行免疫组织化学染色，计数局部肿瘤组织中Bcl-2阳性、Bax阳性细胞数量，计算Bax/Bcl-2。　　结果：1.抑瘤率：治疗后8d、16d，治疗组较对照组肿瘤体积小(P<0.05)，其中，PIT组较PDT组、NK组肿瘤体积明显缩小(P<0.05)；PDT组、NK组、PIT组治疗后16天的抑瘤率分别为56.43％、56.99％、80.51％，PIT组显著高于PDT组和NK组。　　2.生存时间：各治疗组小鼠生存时间较对照组明显延长(P<0.05)。PIT组较PDT组、NK组显著延长(P<0.05)。　　3.标记细胞宿主体内重要脏器分布：NK细胞输入后1d～8d，在小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织中均有分布，其中以肿瘤组织内聚集最多；标记细胞瘤内浸润密度，以输入后2d最高，各时间点PIT组又显著高于NK组(P<0.05)。　　4.各组小鼠肿瘤HE染色：治疗后2d，对照组肿瘤细胞呈弥漫性生长，细胞变性坏死及免疫细胞少见；NK组肿瘤组织呈灶性坏死，间质中可见较多淋巴细胞浸润；PDT组可见瘤细胞核固缩，大片状坏死，较多微血管破坏；PIT组肿瘤组织呈大片状坏死，微血管破坏显著，组织间可见大量红细胞溢出，瘤内及其周围(尤其血管损伤部位)可见大量淋巴细胞和少量中性粒细胞浸润，免疫细胞浸润密度及肿瘤组织坏死面积均较NK组增多。　　5.外周血中NK细胞：在治疗后1d～6d，PIT组较对照组明显增高(P<0.05)；治疗后1d～4d，NK组较其余各组增高(P<0.05)。　　6.外周血T细胞亚群：CD4+T细胞：NK组在治疗后12h～4dCD4+T细胞一直维持在较高水平，上述时间点与PDT、对照组相比差异有统计学意义，在治疗后12h～2d，与PIT组也有明显差异；治疗后2dPIT组CD4+T细胞较对照组、PDT组有显著差异(P<0.05)；CD8+T细胞：PIT组、NK组在治疗后1d～6d，PDT组在4d～6d较对照组CD8+T细胞增高(P<0.05)。PIT组在治疗后1d～6d，NK组在治疗后1d～4d较P-DT组明显增高(P<0.05)。PIT组在治疗后1d、2d、6d较NK组明显增高(P<0.05)。　　7.小鼠脾细胞杀伤活性：效靶比为10:1、20:1和50:1时，治疗组脾细胞杀伤活性均显著高于对照组，其中PIT组又显著高于NK组、PDT组(P<0.05)。　　8.血清细胞因子IFN-γ：12h～6dNK组和PIT组，2d～6dPDT组小鼠血清IFN-γ浓度较对照组显著增高(P<0.05)。1d～6dNK组和12h～6d PIT组较PDT组血清IF-N-γ浓度明显升高(P<0.05)；12h，2d～6dPIT组又高于NK组(P<0.05)。　　9.各组小鼠肿瘤Bcl-2-IHC、Bax-IHC染色：治疗后2d，治疗组Bcl-2蛋白表达明显低于对照组，PIT组又显著低于NK组、PDT组(P<0.05)；治疗组Bax蛋白表达明显高于对照组，PIT组又显著高于NK组、PDT组(P<0.05)。　　结论：1.NK细胞经静脉输入荷瘤小鼠体内后在肺、肝、脾、肿瘤组织中均有分布，以肿瘤组织内为著；联合PDT可增加NK细胞瘤内浸润密度。　　2.PDT和静脉输注的NK细胞均可促进外周血CD8+T细胞增殖活化，增强小鼠脾细胞杀伤活性，升高血清IFN-γ水平，下调瘤内Bcl-2，上调瘤内Bax的表达。另外，静脉输注的NK细胞亦可促进CD4+T细胞增殖活化。　　3.PDT联合静脉输注的NK细胞具有协同抗肿瘤作用，抑瘤疗效优于单纯P-DT和静脉输注的NK细胞。