四株海洋放线菌次级代谢产物及其生物活性的研究

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自从抗生素被发现以来,它已帮助人们解决了很多问题。抗生素的使用,加上当时住房、生活条件的改善,使得一些疾病的致死率大大下降。上世纪50年代,随着青霉素、链霉素的发现,抗生素进入了黄金时期。各大药厂纷纷加入到抗生素的生产的队伍中来。开始的一段时间抗生素的确帮助人们解决了很大的问题。然而随着抗生素使用数量的增加,一系列的问题也随之而来。病原菌为了生存下去,它们发生了变异来适应抗生素的这种拮抗作用,这就使得病原菌产生了耐药性。其次,新型抗生素的研发速度没有人们想象中那么快,但是人们对抗生素的需求却没有减少。因此急需开发新的抗生素来应对这些问题。放线菌是一类高(C+G)%的革兰氏阳性菌。目前人们日常用的抗生素80%都是由放线菌产生的,并且一些放线菌还能产生酶抑制剂以及维生素等物质。然而近几年来人们对放线菌的研究大多集中在土壤放线菌,研究者们发现从土壤放线菌中分离出结构新颖,并且生物活性好的单体化合物是越来越困难。且随着细菌耐药性以及各种疾病尚未完全攻克,因此开发新的药源,发现更有效的药物成为当前研究的重点和热点。而海洋放线菌因其所处生存环境特殊,在其进化演变的过程中,其次级代谢产物相对于土壤放线菌来说结构相对丰富,并且具有抗菌,抗病毒、抗肿瘤、病虫害等生物活性,是微生物药物的重要来源。这也为海洋来源药物的研发奠定了基础。本课题对35株放线菌进行筛选,筛选出四株放线菌Streptomyces sp.S1610-1、Streptomyces sp.XY1812-4、Streptomyces sp.NH1836、Nocardiaceae OC1611-1。对四株放线菌进行发酵处理,发酵后的固体培养基用乙酸乙酯萃取,减压浓缩后获得粗提物。再对粗提物进行分离,获得单体化合物,最后对单体化合物进行生物活性研究。菌株Streptomyces sp.S1610-1为实验室提供,该菌株是从海绵体内分离得到的放线菌,选择产孢(YMS)培养基,经固体发酵,乙酸乙酯萃取,萃取液浓缩后得到6.05 g粗提物,对粗提物采用正相柱层析以及HPLC等技术进行纯化,利用现代化合物结构鉴定手段对化合物的结构进行鉴定,得到化合物1-7,共七个化合物。菌株Streptomyces sp.XY1812-4为从威海小石岛潮间带采集的泥沙分离出来的放线菌,选择高氏一号培养基,经固体发酵,乙酸乙酯萃取,减压蒸馏萃取液后得到16.5 g粗提物,并对其粗提物经正相柱色谱,反相柱色谱以及HPLC等分离技术分离纯化,利用核磁共振图谱鉴定化合物结构,得到化合物8-12,共五个化合物。菌株Nocardiaceae OC1611-1为实验室提供,该菌株为威海小石岛海泥样品分离得到,选择高氏一号培养基,固体发酵,乙酸乙酯萃取后得到10.8 g粗提物,并对粗提物进行正向硅胶色谱以及HPLC分离纯化,利用核磁共振鉴定分子结构,得到化合物13-18,共六个化合物。菌株Streptomyces sp.NH1836为实验室提供,该菌株是从海南采集海泥样品分立而得到的放线菌,选择高氏一号固体培养基对放线菌进行发酵,萃取溶剂使用乙酸乙酯,蒸干乙酸乙酯萃取液后,最终得到粗提物24.6 g,采用硅胶柱层析、Sephadex LH 20凝胶柱层析法对粗提物进行分离纯化,鉴定单体化合物结构,得到两个化合物19,20。对得到的部分化合物进行抑菌活性研究,其中化合物9、16、19对大多数指示菌株都有抑制作用,并且化合物19抑制效果最好。化合物11、12仅对部分指示菌株有抑制作用。化合物3、6对所有指示菌株均无抑制作用。
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