目的:目前,化疗已经成为肌层浸润性膀胱癌常见的辅助治疗方法,然而,从整体来看,膀胱癌术后复发率及进展率仍没有得到很大的改观,因此,如何在研究改进手术治疗膀胱癌的同时,探寻更为有效的药物化疗方案具有十分重要意义。本实验分别将O-GlcNAc糖基化水解酶(OGA)抑制剂(Thiamet-G、THI)、奥沙利铂(oxaliplatin、OXA)、以及二者联合(THI+OXA)作用于膀胱癌EJ细胞,设定相应的阴性对照组,运用不同的实验方法及指标观察各组药物对细胞增殖及凋亡的影响,并尝试探讨其机制,为膀胱癌化疗方案的改进提供理论基础。方法:体外培养膀胱癌EJ细胞,并分为阴性对照组、THI组、OXA组、联合组。将不同的处理因素作用于对数生长期的EJ细胞。首先,经过不同药物不同浓度处理不同时间后,观察细胞增殖情况(MTT法、CCK-8法、平板克隆实验法);其次,利用MTT法筛选出的最佳药物浓度及处理时间,观察不同药物作用后细胞凋亡及周期情况的变化(流式细胞术);最后,观察不同药物作用EJ细胞后Caspase-3、Caspase-9蛋白以及促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况(Western Blot技术)。结果:1、单独使用THI处理EJ细胞,其生长和增殖情况不受抑制,单用OXA以及联合应用THI后,细胞增殖受到明显抑制,较阴性对照组差异有统计学意义(p<0.05),且表现出时间浓度依赖性,OXA对EJ细胞的最佳作用浓度是10umol/L,作用48h后抑制增殖效果最佳;二者联合与单用OXA相比,细胞增殖抑制率明显增加,并且差异有统计学意义(p<0.05)。2、流式细胞术结果显示:经药物处理48h后,OXA组与OXA+THI组细胞凋亡率分别为13.51±2.47%,31.25±3.17%;较阴性对照组差异有统计学意义(P<0.05),且OXA+THI组的细胞凋亡率明显大于OXA组(p<0.05);流式细胞术测细胞周期发现两组细胞生长均多阻滞于S期。3、Western Blot技术检测发现,单用THI处理EJ细胞,较阴性对照组各蛋白表达并无差别;OXA处理EJ细胞后,Caspase-3、Caspase-9、Bax表达明显升高,在OXA+THI组中,上述各蛋白的表达升高更加明显。但Bcl-2的表达在各种之间并未表现出明显差异。结论:1、THI作为O-GlcNAc糖基化水解酶(OGA)的抑制剂,其本身对膀胱癌EJ细胞并不产生明显的作用。2、OXA可抑制膀胱癌EJ细胞的增殖、促进其凋亡,且其杀伤效果在一定浓度和时间范围内呈时间-效应关系和浓度-效应关系。3、THI联合OXA共同作用EJ细胞后,可以明显增强OXA对EJ细胞的杀伤作用,即增强了EJ细胞对化疗药物OXA的敏感性。4、OXA联合THI对EJ细胞的凋亡作用可能通过激活caspase-3、caspase-9级联反应实现,并且可能与促凋亡蛋白Bax表达增强有关,其具体作用原理仍需进一步研究阐明。