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在本论文工作中,我们使用基因枪作为转基因工具,对人Her-2/neu基因胞外区DNA疫苗pWRG-neu在预防和治疗实验小鼠肿瘤及抗转移的作用和机制进行了研究。 对基因枪介导的in vitro和in vivo转基因效率、转基因的表达时间进行研究表明,基因枪能够有效的对体外培养的细胞系和实验小鼠皮肤转基因,外源基因在转基因部位获得稳定表达。 为排除可能由DNA疫苗pWRG-neu质粒骨架的免疫原性引起的干扰,构建了与pWRG-neu含相同的人Her-2/neu基因胞外区的表达质粒pcDNA-neu,将pcDNA-neu转染入培养的小鼠黑色素瘤细胞B16F10,建立高表达人neu基因的小鼠黑色素瘤细胞株B16F10-neu。用基因枪轰击,进行DNA疫苗pWRG-neu皮内转移,对实验小鼠黑色素瘤B16F10-neu进行预防、治疗和抗转移实验,结果表明DNA疫苗的免疫能够明显推迟移植瘤的生长,延长小鼠生存期,获得较好的抗肿瘤效果。 为提高DNA疫苗的抗肿瘤效果,共转移细胞因子基因IL-4,GM-CSF和IL-12。实验结果显示,在小鼠肿瘤预防、治疗和抗转移实验中,共转移细胞因子基因佐剂,未能显著延长动物的生存期。MTT法测定免疫小鼠的脾淋巴细胞CTL活性发现,DNA疫苗pWRG-neu共转移IL-12的免疫方式,诱导出的CTL活性最高,共转移GM-CSF的免疫方式次之,此后依次是单用DNA疫苗pWRG-neu的免疫方式和DNA疫苗加IL-4的方式。取免疫小鼠的血清,Western blotting法检测到免疫后的小鼠血清中含特异的抗人c-erbB-2抗体。 分离健康人外周血淋巴细胞,将其中一部分转pWRG-neu,再与剩余部分做混合淋巴细胞培养,观察增殖现象,证明我们构建的DNA疫苗,含有人类可识别加工的抗原表位。