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研究背景和目的:动脉粥样硬化是一种复杂的炎症性疾病,其发生发展涉及细胞内胆固醇水平紊乱以及泡沫细胞形成。氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,OX-LDL）是动脉粥样硬化形成的独立风险因素,在动脉粥样硬化发生发展中发挥重要作用。本研究发现胰岛素样生长因子结合蛋白样1（insulin-like grow factor binding protein like 1,IGFBPL1）能通过影响胆固醇逆向转运,从而影响泡沫细胞形成,并最终在动脉粥样硬化发生发展中发挥作用。低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptors,LDLR）能够调控胆固醇逆向转运,在维持细胞内胆固醇稳态中发挥重要作用。本研究目的是探索IGFBPL1/AnxA2/PCSK9/LDLR信号通路在动脉粥样硬化中的作用以及具体相关分子机制。材料与方法:1.将人肾动脉组织设立为对照组,人颈动脉斑块组织设立为实验组进行基因芯片实验找出差异倍数小于3倍且p＜0.01的基因。设定临床病人纳入标准,使用ELISA试剂盒对基因芯片的结果进行临床血清学验证。2.用0,25,50,100ug/ml OX-LDL处理平滑肌细胞,实时荧光定量PCR（Real-Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）和蛋白印迹（Western Blot）检测靶基因和靶蛋白的表达情况。3.构建 H5188pLenti-EF1a-mcherry-P2A-Puro-CMV-MCS-3Flag 空载质粒作为对照组,H7149pLenti-EF 1 a-mcherry-P2A-Puro-CMV-IGFBPL 1-3FlagH714 质粒作为实验组,分别使用空载质粒和IGFBPL1过表达质粒处理平滑肌细胞,用Flag抗体拉下与之结合的蛋白,切下条带区域以及平行对照区域进行LC-MS,寻找与靶蛋白相关的调控胆固醇代谢的蛋白,并用co-IP验证质谱结果。4.用0ug/ml OX-LDL与50ug/ml OX-LDL分别处理平滑肌细胞,用细胞免疫荧光实验对平滑肌细胞内的目的蛋白以及细胞核进行染色,倒置激光共聚焦显微镜拍摄目的蛋白在平滑肌细胞内定位情况以及定量变化。5.对平滑肌细胞转染 pcDNA-control 或 pcDNA-IGFBPL1或si-control 或si-AnxA2平滑肌细胞处理8小时,在换液的时候加入0ug/ml OX-LDL或50ug/ml OX-LDL作为处理因素,处理48小时后,消化细胞,离心收集细胞,裂解细胞,研磨细胞,离心留上清,50℃金属浴加热器蒸发液体,真空干燥箱干燥,buffer溶液溶解脂质,采用胆固醇含量检测试剂盒检测细胞内总胆固醇以及游离胆固醇含量。研究结果:1.OX-LDL通过下调IGFBPL1表达影响细胞内胆固醇平衡。基因芯片结果显示IGFBPL1在动脉硬化斑块组织中表达量比正常组织低,并用ELISA的方法在人血清中得到验证。OX-LDL处理平滑肌细胞后,qRT-PCR和免疫印迹结果显示OX-LDL呈浓度依赖性抑制平滑肌细胞中IGFBPL1表达。胆固醇检测试剂盒检测结果显示OX-LDL通过IGFBPL1调节胆固醇平衡。2.IGFBPL1通过与AnxA2结合介导OX-LDL影响胆固醇平衡。质谱和co-IP检测到IGFBPL1与AnxA2两者相互作用,且在过表达IGFBPL1的组中,AnxA2蛋白呈高表达。细胞免疫荧光实验结果显示OX-LDL下调IGFBPL1和AnxA2表达。胆固醇检测试剂盒检测结果显示OX-LDL通过AnxA2影响胆固醇平衡。3.OX-LDL通过下调IGFBPL1影响PCSK9和LDLR表达。蛋白免疫印迹结果显示IGFBPL1通过AnxA2影响PCSK9和LDLR表达。细胞免疫荧光实验结果显示OX-LDL同时调控IGFBPL1和LDLR。蛋白免疫印迹结果显示OX-LDL通过 IGFBPL1 调控 AnxA2、PCSK9 和 LDLR。结论:1.OX-LDL通过下调IGFBPL1表达影响细胞内胆固醇平衡。2.IGFBPL1通过与AnxA2结合介导OX-LDL影响胆固醇平衡。3.OX-LDL通过下调IGFBPL1影响PCSK9和LDLR表达。