目的:本研究目的是通过收集门诊或住院明确诊断为肝豆状核变性患者的临床数据,并采集其血样,对ATP7B基因进行检测,获得基因突变的结果,同时结合临床表型特点进行分析,探讨基因变异对于该病发生、发展等的影响。方法:在理解并签署知情同意书的基础上,收集68例明确诊断为WD的患者的个人基本资料、相关疾病史、临床表现、生化指标、诊治过程、家族史等资料,同时采集其静脉血样送至深圳华大临床检验中心,应用NGS(Next Generation Sequencing)测定标本的ATP7B基因的外显子,与ATP7B参考序列比对,查找基因突变区。测定患者基因变异位点后,找出基因突变的特点,并查找参考文献及ATP7B基因数据库,与目前已知的基因变异位点比较,力求发现新的致病基因变异位点,同时将基因变异情况与患者临床数据相结合,分析患者基因型与临床表型之间的关系。结果:1、68例明确诊断为肝豆状核变性的患者进行了ATP7B基因测序,有66例患者检测出至少一个突变,检出率为97.06%(66/68)。共涉及48种基因突变,错义突变35种,剪接位点突变2种,无义突变1种,框移突变10种(插入突变5种,缺失突变5种)。2、48种基因突变发生在第1、2、5、7、8、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20号外显子以及4、13号内含子,其中8号外显子突变种类最多,为6种,其后较高的有11号外显子5种、18号外显子5种、13号外显子4种、16号外显子4种。其中,8号外显子上的2333G>T突变频率最高,突变频率达到45.59%(31/68),其次为8号外显子上的另一个突变2310C>G,突变频率是35.29%(24/68),突变较高的还有13号外显子上的2975C>T突变频率为14.71%(10/68)、16号外显子上的3443T>C突变频率为13.24%(9/68)。3、我们检测出了8种多态性位点,均为既往报道过的常见多态。4、在检测出的48个基因突变中,有22种突变为新突变。查阅文献报道及WD基因突变的数据库:http://www.wilsondisease.med.ualberta.ca/database.asp,未发现以上22个突变。且这22个突变在对照组均未检测到,故我们认为这些突变是与肝豆状核变性相关的致病新突变。5、有Arg778Leu突变组与无Arg778Leu突变组两组进行比较,在血清铜蓝蛋白、ALT、ALP之间的差异具有统计学意义(P<0.05),说明与无Arg778Leu突变组相比,有Arg778Leu突变组有着较低水平的血清铜蓝蛋白、ALT、ALP,且虽说两组之间对于AST无统计学差异,但有Arg778Leu突变组AST均值更低一些,提示存在Arg778Leu突变的患者有着较低的血清铜蓝蛋白以及较轻的肝脏损伤。6、有Pro992Leu突变组与无Pro992Leu突变组两组进行比较,在血清铜蓝蛋白、AST、ALT、ALP之间的差异有统计学意义,说明与无Pro992Leu突变组相比,有Pro992Leu突变组有着较高水平的血清铜蓝蛋白、AST、ALT、ALP,提示存在Pro992Leu突变的患者有着更高水平的血清铜蓝蛋白以及较重的肝脏损伤。7、对起病年龄≤12岁的WD患者进行研究发现,存在2975C>T突变、3809A>G突变的患者倾向于在12岁之前发病,存在3443T>C突变的患者倾向于在12岁之后发病,存在2333G>T突变患者的发病与患者的年龄无关。结论:1.本研究ATP7B基因突变检出率为97.06%,共发现48种基因突变,其中22种为新发突变。2.Arg778Leu突变与Pro992Leu突变是本研究中的两大高频突变区域,且与患者的血清铜蓝蛋白、肝功能酶学有着一定的联系。3.为进一步研究基因型与临床表型之间的联系,我们分析了发病年龄小于12岁患者的基因突变发现,2975C>T突变、3809A>G突变的患者倾向在12岁之前、3443T>C突变的患者倾向于12岁之后发病,而本研究中突变频率最高的2333G>T突变的存在却与发病年龄无明显的关联。4.本研究的样本量较少,存在局限于不足,仍需进一步扩大样本量研究与探讨基因型与临床表型之间的联系。