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β-防御素和Cathelicidins是家禽体内两个主要抗菌肽家族,在家禽抗感染先天免疫中发挥着重要的作用。益生性鼠李糖乳杆菌MLGA及其完整细胞壁肽聚糖可促进鸡免疫细胞和肠组织β-防御素9(β-defensin9,AvBD9)基因的表达。然而有关鼠李糖乳杆菌MLGA在肉鸡体内发挥抗感染作用和防御素表达的调控机制仍未完全阐明。本试验从鸡体内开展研究,探讨肉鸡日粮中鼠李糖乳杆菌MLGA适宜添加量,并在此基础上探讨感染鸡肠炎沙门氏菌条件下日粮添加鼠李糖乳杆菌MLGA对鸡天然免疫功能的影响,初步阐明鼠李糖乳杆菌MLGA发挥抗感染作用的途径和机制,为益生菌的筛选和推广应用提供更加坚实的理论基础和试验依据。试验一:选用200羽1日龄艾拔益加肉鸡(AA肉鸡)白羽公肉仔鸡随机分成5组,每组4个重复,每个重复10羽。5个处理组为对照组、抗生素组和3个不同水平鼠李糖乳杆菌MLGA试验组,对照组饲喂不含任何抗生素的基础日粮,抗生素组在基础日粮的基础上添加杆菌肽锌40mg/kg,试验组在基础日粮的基础上分别添加1×109cfu/kg、1×1010cfu/kg和1×1011cfu/kg鼠李糖乳杆菌MLGA,饲养周期为21d。在试验开始的第1d、第14d和第21d,以重复为单位称量各组鸡只的空腹重并每天记录饲料投料量和剩余量,以计算平均日采食量、平均日增重和料重比。在14d和21d时,从每个重复组随机取2只鸡翅静脉采血各10mL,并立即致死分离脾脏、法氏囊和胸腺,无菌条件下取出盲肠内容物,用干净的载玻片刮取空肠中段肠黏膜。用于测定血清细胞因子、肠黏膜sIgA、免疫器官指数和盲肠内容物中大肠杆菌的载菌量。结果显示:日粮中添加1×109cfu/kg、1×1010cfu/kg和1×1011cfu/kg三个水平的鼠李糖乳杆菌MLGA均能显著降低1~21日龄肉鸡料重比,改善肉鸡的生长性能(P<0.05)。日粮添加鼠李糖乳杆菌MLGA对肉鸡血清免疫球蛋白和肠黏膜sIgA的含量有不同程度的提高作用,添加1×1010cfu/kg鼠李糖乳杆菌MLGA能显著提高血清IL-10含量,降低IL-6含量(P<0.05),对机体免疫和抗炎反应起着重要的作用。添加1×1010cfu/kg和1×1011cfu/kg鼠李糖乳杆菌MLGA可显著抑制盲肠内大肠杆菌的增殖(P<0.05)。综合以上指标,肉鸡日粮鼠李糖乳杆菌MLGA适宜的添加量为1×1010cfu/kg。试验二:选取1日龄AA白羽公肉鸡鸡苗120羽,随机分为3个处理组,每个组4个重复,每个重复10羽。3个处理组分为对照组,肠炎沙门氏菌组和持续饲喂鼠李糖乳杆菌MLGA1×1010 cfu/kg并感染肠炎沙门氏菌组,饲养周期为21d。对照组饲喂不含任何抗生素的基础日粮,感染组于6日龄8:00 am经食道灌服1×106 cfu鸡肠炎沙门氏菌。在7日龄、10日龄、14日龄和21日龄每个重复随机抽取1只鸡,心脏采血,分离血清,用于测定细胞因子。剪取十二指肠、回肠和空肠中段约3cm,经常规石蜡切片,测定其绒毛长度和隐窝深度,并计算绒毛长度和隐窝深度的比值。无菌采取肝脏和盲肠内容物,用于测定其肠炎沙门氏菌的载菌量。结果显示:肉鸡感染肠炎沙门氏菌前后持续喂服鼠李糖乳杆菌MLGA能够显著降低血清中C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、趋化因子RANTES、白细胞介素8(Interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)含量,并提高转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量(P<0.05)。鼠李糖乳杆菌MLGA极显著降低21d肉鸡盲肠内容物中沙门氏菌的含量(P<0.01),同时能够显著改善肉鸡感染肠炎沙门氏菌后空肠的绒毛长度,提高绒毛长度和隐窝深度的比值(P<0.05),提高肉鸡对肠炎沙门氏菌的抵抗力。试验三:试验动物和分组同试验二,在7日龄、10日龄、14日龄和21日龄每个重复随机抽取1只鸡,采用心脏采血法采取抗凝血4ml,用于分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),迅速处死后在在冰浴上剪取脾脏、肝脏、法氏囊、空肠、回肠和盲肠,应用PT-PCR方法检测样品中Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR2)、NOD1(nucleotidebinding oligomerzation domain,NOD)、嗜中性白细胞碱性磷酸酶3(neutrophilic alkaline phosphatase3,NALP3)、AvBD9和Cath-B1(Cathelicidin-B1)基因的mRNA相对表达量。结果表明:肉鸡感染肠炎沙门氏菌后,鼠李糖乳杆菌能不同程度地促进感染肠炎沙门氏菌的肉鸡组织和PBMC中TLR2、Cath-B1和AvBD9 mRNA的表达,提高肉鸡抗肠炎沙门氏感染免疫功能,且本试验结果表明肉鸡可能通过TLR2介导Cath-B1的表达。综上所述,日粮中添加鼠李糖乳杆菌MLGA可显著提高肉仔鸡的生产性能,同时能提高肉仔鸡血清中免疫蛋白水平和抗炎细胞因子含量。持续喂服鼠李糖乳杆菌MLGA可通过调节细胞因子的分泌、提高天然免疫相关基因如宿主防御肽(host defense peptides)Cath-B1和AvBD9的表达而提高肉鸡对肠炎沙门氏菌感染的抵抗力。