RNA干扰联合氧化苦参碱抑制VEGF治疗子宫内膜癌的实验研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hongqiulongxi
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目的:观察RNA干扰联合氧化苦参碱(Oxymatrine,Oxy)对子宫内膜癌Ishikawa细胞株血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的基因表达及细胞增殖的影响.方法:针对VEGF基因RNA干扰的有效作用位点,利用pRNAT-CMV3.2-Neo载体,设计并构建能在肿瘤细胞内表达siRNA的质粒pRNAT-CMV3.2-Neo-VEGF,以及阴性对照表达质粒pRNAT-CMV3.2-Neo-neg;将构建的表达质粒转染子宫内膜癌Ishikawa细胞株,并加入中药Oxy,采用RT-PCR检测VEGF mRNA表达的变化,Western印迹法检测VEGF蛋白的表达,MTT比色法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,显微镜下进行细胞形态学观察,人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)观察细胞的侵袭能力。结果:构建的表达质粒成功转染Ishikawa细胞株,RNA干扰联合Oxy可下调细胞中VEGFmRNA及其蛋白的表达,明显抑制Ishikawa细胞的增殖,细胞周期发生改变,G1期细胞比例增加,S期细胞则减少,荧光显微镜可见细胞凋亡形态学变化,Ishikawa细胞侵袭基底膜的能力明显被抑制。结论:RNA干扰联合Oxy可抑制Ishikawa细胞增殖,诱导Ishikawa细胞凋亡及分化,降低肿瘤细胞的侵袭能力;其作用机制可能与成功下调VEGF基因的表达有关。RNA干扰联合Oxy效果强于单用中药治疗或单用RNA干扰效应,证实了基因治疗联合药物治疗肿瘤的可行性和有效性,为其它肿瘤的基因治疗探索了一条新的途径。
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