论文部分内容阅读
目的： 本实验通过检测胶原诱导关节炎(Collagen Induced Arthritis，CIA)大鼠血清及关节液中Dickkopf-1(Dkk1)的水平，观察药物醋酸泼尼松(Prednisone，PDN)、来氟米特(Leflunomide，LEF)和99锝-亚甲基二膦酸盐(Technetium tertiary diphospine，99Tc-MDP)干预后上述指标的变化情况，结合大鼠影像学及后踝关节病理学的改变，初步探讨Dkk1在CIA大鼠骨质侵蚀中的作用，并研究药物干预对CIA大鼠Dkk1血清及关节液浓度的影响，比较各药物的治疗效果。 方法： 85只雄性Wistar大鼠随机选取10只为空白组，余为造模组；造模组大鼠尾根部皮下多点注射鸡Ⅱ型胶原乳剂(0.5ml/只)，1周后以相同方法相同剂量加强免疫以诱导CIA模型，空白组大鼠与造模组大鼠以相同时间、相同部位注射等体积生理盐水。4周后对造模组大鼠进行关节炎评分，记录大鼠关节炎指数(arthritis index，AI)值。选择50只诱导成功的CIA大鼠(AI≥6分)随机分为模型静脉组、模型灌胃组、醋酸泼尼松(PDN)组、来氟米特(LEF)组和99锝-亚甲基二膦酸盐(99Tc-MDP)组，每组10只，PDN组给予醋酸泼尼松5mg/kg/d灌胃，LEF组给予来氟米特5mg/kg/d灌胃，99Tc-MDP组给予0.05ug/ke/d99Tc尾静脉注射，模型灌胃组每日给予与LEF组等体积生理盐水灌胃，模型静脉组每日给予与99Tc-MDP组等体积生理盐水尾静脉注射，持续三周；每周测量各组大鼠体重、足爪容积、AI值。药物干预结束后，各组大鼠在麻醉下行后踝关节X线摄片，应用Larsen评分评价骨侵蚀程度；各组大鼠心脏取血，处死后留取后踝关节液及关节组织，后踝关节组织行HE染色病理评分；采用ELISA方法测定各组大鼠血清及关节液Dkk1浓度，并分析血清与关节液Dkk1浓度之间的相关性；Larsen评分与血清、关节液Dkk1浓度的相关性。 结果： 1)造模组共有53只大鼠造模成功，成功率约70.6％； 2)给药3周后，模型静脉组、模型灌胃组、PDN组、LEF组和99Tc-MDP组大鼠体重均低于空白组(P<0.05)；模型静脉组、模型灌胃组大鼠体重低于各给药组，两组之间无统计学差异(P>0.05)，各给药组中，PDN组大鼠体重高于LEF组、99Tc-MDP组(P<0.05)，LEF细体重高于99Tc-MDP组(P<0.05)； 3)给药3周后，模型静脉组、模型灌胃组、PDN组、LEF组和99Tc-MDP组大鼠足爪容积值均高于空白组(P<0.05)；模型静脉组、模型灌胃组大鼠足爪容积值高于各给药组，两组之间无统计学差异(P>0.05)，各给药组中，PDN组大鼠足爪容积值低于LEF组、99Tc-MDP组(P<0.05)，LEF组足爪容积值低于99Tc-MDP组(P<0.05)； 4)给药3周后，模型静脉组、模型灌胃组大鼠AI值高于各给药组，两组之间无统计学差异(P>0.05)，各给药组中，PDN组大鼠AI值低于LEF组、99Tc-MDP组(P<0.05)，LEF组AI值低于99Tc-MDP组(P<0.05)； 5)模型静脉组、模型灌胃组、PDN组大鼠后踝关节Larsen评分高于LEF组和99Tc-MDP组(P<0.05)，三组间无统计学差异(P>0.05)，99Tc-MDP组Larsen评分低于LEF组(P<0.05)； 6)模型静脉组、模型灌胃组、PDN组大鼠踝关节骨质侵蚀病理评分高于LEF组和99Tc-MDP组(P<0.05)，三组间无统计学差异(P>0.05)，99Tc-MDP组评分低于LEF组(P<0.05)； 7)模型静脉组、模型灌胃组、PDN组、LEF组和99Tc-MDP组大鼠血清及关节液中Dkk1浓度均高于空白组(P<0.05)；模型静脉组、模型灌胃组、PDN组大鼠血清及关节液Dkk1浓度无统计学差异(P>0.05)，LEF组、99Tc-MDP组大鼠血清及关节液Dkk1浓度低于模型组及PDN组(P<0.05)，其中99Tc-MDP组低于LEF组(P<0.05)。各组大鼠血清与关节液Dkk1浓度之间呈正相关(r=0.794，P<0.05)； 8)模型静脉组、模型灌胃组、PDN组、LEF组和99Tc-MDP组大鼠的后踝关节Larsen评分与血清及关节液中的Dkk1浓度呈正相关(r=0.288，P<0.05；r=0.433，P<0.05)。 结论： 1)应用鸡Ⅱ型胶原能够成功诱导CIA大鼠模型； 2)模型静脉组、模型灌胃组、PDN组、LEF组和99Tc-MDP组大鼠血清及关节液Dkk1浓度升高；血清Dkk1与关节液Dkk1浓度呈正相关； 3)PDN、LEF、99Tc-MDP均可降低CIA大鼠后踝关节足爪容积及AI值，其中PDN作用优于LEF、99Tc-MDP； 4)99Tc-MDP、LEF能够降低CIA大鼠Larsen评分、减轻病理学上骨质侵蚀评分、降低血清及关节液中Dkk1浓度，其中99Tc-MDP的作用优于LEF；PDN组大鼠Larsen评分、骨质侵蚀评分、血清及关节液中Dkk1浓度较模型组无统计学差异； 5)模型静脉组、模型灌胃组、PDN组、LEF组和99Tc-MDP组大鼠的后踝关节Larsen评分与血清及关节液Dkk1呈正相关，提示血清及关节液中的Dkk1可能参与了骨质侵蚀的过程。