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目的采用国际通用的脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,以Notch信号通路为核心应用分子生物学技术如PCR、Western blot检测相关指标,应用统计学手段,结合藏医药理论,探讨藏医用于治疗缺血性脑血管病的白脉疗法(本课题选择口服如意珍宝丸与患肢涂白脉软膏并按摩相结合的疗法)的疗效机制,为阐明藏医白脉疗法在缺血性卒中大鼠肢体功能康复方面的调节机制提供依据。方法(1)造模方法及分组:参照Belayev报道的线栓法加以改良后建立右侧大脑中动脉栓塞缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,建模后依照Longa评分法评分,评分为0、4分的排除,1-3分的纳入本研究,将每个分值的大鼠应用随机表分为以下六组:假手术组、模型组、阳性别照组、如意珍宝丸组、白脉软膏组、白脉疗法组,每组根据缺血再灌注时间分为两个亚组,即7天组和14天组。每组每天上午灌胃给药,并于左侧患肢涂抹药物。阳性组大鼠灌胃辛伐他汀药液,如意珍宝丸组和白脉疗法组大鼠灌胃如意珍宝丸药液,其余组均为生理盐水;白脉软膏组及白脉疗法组涂抹白脉软膏,其余组均涂抹凡士林。(2)指标检测:①常规检测:每天对各组大鼠皮毛状态观察并记录。②脑组织生理病理影响:应用HE染色在光镜显微镜下观察皮层、缺血半暗带、海马区的炎性细胞浸润、神经元核固缩和软化灶情况;尼氏染色观测皮层神经元的尼氏小体变化情况。③行为学检测:分别于术后3天、7天、14天对各组大鼠行为学评分,具体内容包括:姿势反射测验(postural reflex test)、肢体放置实验(limb placement test)。④神经再生和血管再生:运用免疫组化检测GAP-43和VEGF1的表达。⑤Notch信号通路:运用免疫组化、Western Blot技术、Real-time PCR技术从蛋白、基因水平检测Hesl、Jaggedl的动态变化。结果(1)常规检测:各组大鼠皮毛状态随着缺血再灌注时间的增加出现差异,7天时已经有差异出现,14天时差异显著:白脉疗法组的大鼠毛色和假手术组相近,毛色正常,其他组的大鼠毛色均不同程度的出现枯黄状态,模型组最差;(2)行为学检测:两种行为学评分均显示白脉疗法组大鼠肢体功能状态优于模型组,与模型组相比在7天、14天这两个时间点均有显著性差异(P<0.05),且两种行为学评分均显示白疗组大鼠14天时肢体功能状态好于7天。(3)脑组织生理病理影响:HE染色发现7天时白疗组大鼠大脑皮层、缺血半暗带、海马区的炎性细胞浸润、神经元核固缩和软化灶程度低于模型组,有明显差异,14天差异进一步增强。尼氏染色发现白脉疗法组大鼠神经元尼氏小体数量在7天和14天时均明显多于模型组。(4)神经血管再生:结果表明白疗组大鼠7天和14天时的GAP-43和VEGF1蛋白表达量显著性高于模型组(P<0.05),且14天时两类蛋白的表达量均稍低于7天。(5)Notch信号通路:白疗组7天时能抑制Hesl蛋白的表达、促进Jaggedl蛋白的表达,且与假手术组相比有显著性差异(P<0.05)。14天时抑制Hesl蛋白表达的程度降低,和假手术组没有显著性差异,同时促进Jaggedl蛋白的表达,但表达量明显低于7天。结论藏医“白脉疗法”可以改善缺血再灌注大鼠的肢体功能。主要机理可能是该疗法可以促进缺血再灌注大鼠表达GAP-43和VEGF1,同时通过抑制Hesl蛋白的表达、促进Jaggedl蛋白的表达,调控Notch信号通路,促进缺血后神经和血管的再生,降低脑缺血后神经元受损的程度,从而降低脑缺血后大鼠的脑梗死面积,进而改善脑缺血大鼠的肢体功能,其机理需要进一步的探讨,也需要更多的研究证实。