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研究背景和目的上皮性卵巢癌是一种严重威胁女性健康的恶性肿瘤,致死率居妇科恶性肿瘤的首位。在治疗初期,对铂类药物比较敏感,然而,随着治疗的深入,绝大多数患者出现对铂类药物的耐药并伴随肿瘤的复发,导致卵巢癌患者的5年生存率远低于其它肿瘤,仅为10-30%。Entpd5(ectonucleoside triphosphate dephosphohydrolase 5,又称 CD39L4)是编码内质网的核苷酸水解酶,主要存在于内质网中,介导细胞内核苷酸的分解代谢。Entpd5被发现介导黑色素瘤肿瘤细胞的生存、抵抗内质网应激介导的细胞凋亡,同时可促进肿瘤细胞的转移。在前列腺癌中,研究发现Entpd5表达水平与前列腺癌病变程度呈正相关,且在前列腺癌以铂为基础的化疗耐药中,Entpd5与蛋白激酶Cα介导的Bcl-2的稳定状态相关。Entpd5是否参与上皮性卵巢癌铂类药物的耐药性调节,目前尚无相关报道。本研究旨在探讨Entpd5在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及上皮性卵巢癌中的表达是否有差异,并进一步研究Entpd5是否参与上皮性卵巢癌铂类药物耐药性的调节。研究方法1、Entpd5在良恶性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达情况通过收集临床正常卵巢组织、卵巢良性病变及上皮性卵巢癌的标本,用免疫组化分析Entpd5在正常卵巢组织、卵巢良性病变及上皮性卵巢癌中的表达情况。2、Entpd5表达水平与上皮性卵巢癌细胞对铂类药物耐药性的关系2.1通过CCK8检测不同浓度Cisplatin对7种上皮型卵巢癌细胞增殖能力的影响。荧光定量PCR(q-PCR)分析不同上皮性卵巢癌细胞株中Entpd5的表达水平。2.2选取对铂类药物敏感的Ovcar8和A1847,建立 cisplatin继发耐药的细胞株Ovcar8R和A1847R。对亲本及耐药细胞进行CCK8检测其药物敏感性,Western blot检测Entpd5的表达水平。研究结果1、Entpd5在良恶性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达情况Entpd5在正常卵巢组织中表达很弱或不表达,而其在卵巢良性上皮性病变组织及上皮性卵巢癌组织中显著增加,且Entpd5在上皮性卵巢癌组织中的表达与其在卵巢良性上皮性病变组织的表达相比显著增加,因此我们认为随着卵巢病变的恶化,Entpd5的表达逐渐升高,其与卵巢病变的恶性程度相关。2、Entpd5表达水平与上皮性卵巢癌细胞对铂类药物耐药性的关系2.1细胞水平验证不同上皮性卵巢癌细胞对铂类药物的敏感性与Entpd5表达水平的关系。与其他五种细胞系对比,Ovcar8、A1847细胞对铂类药物敏感性均显著高于其他细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。荧光定量PCR(q-PCR)显示 7种卵巢癌细胞表达不同程度的 Entpd5,Entpd5 的表达依A1847<Ovcar8<Ovcar3<Ovcar4<1GROV1<Ovcar5<SKOV3递增,且差异有统计学意义。结果提示A1847和Ovcar8细胞药物敏感性明显高于其他五种卵巢癌细胞系,且细胞Entpd5表达水平较其他细胞明显降低。2.2选取铂类药物敏感的A1847和Ovcar8细胞系建立相应的耐药株模型,CCK8检测其药物敏感性,并通过Western blot证实Entpd5在卵巢癌铂类耐药细胞中的表达水平。结果显示:A1847、Ovcar8细胞与A1847R、Ovcar8R细胞比较,对铂类药物敏感性差异均有统计学意义(P<0.01)。耐药细胞中Entpd5表达显著高于其在亲代铂类敏感的卵巢癌细胞中的表达,表明上皮性卵巢癌细胞耐铂类药物与Entpd5表达升高有关。结论Entpd5在卵巢不同程度的病变中表达水平不同,其在患病组中上皮性卵巢癌中比良性病变组织中表达显著升高。在上皮性卵巢癌细胞株中,上皮性卵巢癌细胞株耐铂类药物与Entpd5表达升高有关,铂类药物敏感的亲本细胞,建立耐药株后Entpd5表达水平升高,推测Entpd5表达水平升高可能促进上皮性卵巢癌对铂类药物耐药。