天冬酰胺合成酶属于氨基转移酶家族成员之一,可以催化合成天冬酰胺(ASN),从而为蛋白质的合成提供原料。与正常的细胞相比,某些种类的恶性淋巴细胞这种酶的活性很低,不能合成足够量的天冬酰胺,需要依靠细胞外界环境中的天冬酰胺。本研究应用已构建的原核表达质粒pMS-ASNS表达MS2-ASNS融合蛋白,应用细胞融合和杂交瘤技术制备抗人天冬酰胺合成酶单克隆抗体。获得以下结果:1. 42℃热诱导法诱导融合蛋白MS2-ASNS的表达,融合蛋白经SDS-PAGE电泳分离、电洗脱、PBS透析获得纯化的融合蛋白MS2-ASNS,分子量约为55 kDa,与理论值一致。2.应用纯化融合蛋白免疫BALB/C小鼠,取脾细胞应用50%的PEG 3350与SP2/0细胞融合,融合效率为88%,阳性率2.3%。分别用融合蛋白MS2-ASNS和MS2-PAI通过ELISA双筛的方法4次筛选,最终筛选出3株稳定分泌特异性抗人天冬酰胺合成酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D10-9、F4-15和F4-16。3个细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。测定单克隆抗体的亚类分别为IgG1、IgG2a和IgG2a。3.用ELISA法鉴定抗体的特异性和效价。结果表明制备的抗体有很好的特异性,细胞株D10-9分泌的抗体效价为1:2×102 ,F4-15和F4-16分泌的抗体均达到1:5×105; Western-blot等方法鉴定抗体在K562和Hela细胞系中有很高亲和力;采用IHC技术检测天然ASNS在肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402、HepG2和胃癌细胞系SGC-7901、SGC-823及肺癌、宫颈癌、甲状腺癌组织中均为胞浆表达。本研究制备了抗ASNS单克隆抗体,初步检测了ASNS在肿瘤细胞中的表达,为进一步研究ASNS在中线鼻/鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达奠定了基础。