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目的:以广西特有的国家一级保护植物金花茶叶为实验原料,用超声提取法提取其中的皂苷成分,经大孔树脂分离后,用制备型高效液相色谱仪进一步纯化得到金花茶皂苷单体,并对其成分研究,为其进一步的开发利用奠定基础。并对普通种金花茶叶水提取物的指纹图谱进行系统的研究,建立普通种金花茶水提取物的指纹图谱,为金花茶质量控制提供依据。
方法:以新鲜金花茶叶为原料,采用超声波浸提法进行提取,得到金花茶浓缩液。金花茶缩液经过乙醇沉淀去杂、乙醚萃取脱色得到粗皂苷提取液,经过大孔树脂DiaionHP-10层析柱分离,并结合制备型高效液相色谱法进一步分离纯化得到化合物单体,采用化学和谱学方法(UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、MS等)鉴定化合物的结构。采集不同种植基地的金花茶叶,用超声波浸提法进行提取后,经乙醇沉淀除杂、乙醚萃取脱色后,采用HPLC法,在一定的色谱条件下建立金花茶的指纹图谱,以作为金花茶叶质量控制的依据。
结果:从金花茶水提取物中分离出了10个化合物,经过波谱手段对化合物的结构进行了鉴定,鉴定了其中4个,分别是人参皂苷Rg1(JHC1-1)、人参皂苷F3(JHC4)、人参皂苷F1(JHC8)、VinaginsenosideR16(JHC9)。这4个已鉴定的化合物均为首次从金花茶植物中分离到。采用HPLC法,在A(乙腈)-B(0.5%磷酸)梯度洗脱程序:0~20min,A-B(10∶90);20~40min,A-B(14∶86);40~85min,A-B(21∶79);85~105min,A-B(30∶70);105~115min,A-B(30∶70);115~120min,A-B(10∶90);120~130min,A-B(10∶90);流量:1ml/min;柱温:室温;检测波长:292nm,测定不同种植基地10批次普通种金花茶的指纹图谱。指纹图谱中确定了20个共有峰,其中11号为主峰,经标准品指认及光谱确证为表儿荼素没食子酸酯(ECG),作为指纹图谱参照峰。10批次样品的相似度在90%以上。方法学考察结果表明试验精密度、重现性RSD均小于3%,样品在48h内稳定。
结论:本研究从金花茶叶中分离鉴定得出4个皂苷类化合物,均为首次从金花茶叶中得到。金花茶水提取物指纹图谱的建立为其质量控制提供了参考,研究结果对开发利用广西特有金花茶的植物药金花茶具有重要意义。