【摘 要】
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L-酪氨酸是芳香氨基酸的一种,可作为营养添加剂和重要医药化工产品制备原料,现已应用在医药、食品、饲料和化工等领域。同时,它也是一种重要的平台化合物,从L-酪氨酸出发能生成多种具有高附加值的芳香化合物。本文从大肠杆菌BL21(DE3)菌株出发,采用全局优化策略,构建高产酪氨酸的底盘菌株,优化对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、松柏醇的合成模块,并实现在大肠杆菌中从头合成。本文首先对菌株中酪氨酸的合成途径进行改
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L-酪氨酸是芳香氨基酸的一种,可作为营养添加剂和重要医药化工产品制备原料,现已应用在医药、食品、饲料和化工等领域。同时,它也是一种重要的平台化合物,从L-酪氨酸出发能生成多种具有高附加值的芳香化合物。本文从大肠杆菌BL21(DE3)菌株出发,采用全局优化策略,构建高产酪氨酸的底盘菌株,优化对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、松柏醇的合成模块,并实现在大肠杆菌中从头合成。本文首先对菌株中酪氨酸的合成途径进行改造。一方面,敲除阻遏基因tyr R和苯丙氨酸竞争途径基因phe A;另一方面,构建包含解除反馈抑制基因aroGfbr和tyrAfbr以及关键酶基因aroE的酪氨酸模块。另外,敲除甲基供体合成途径中的全局调控基因met J,增加菌株中甲基供体的供应。以葡萄糖为碳源,发酵24h,酪氨酸的产量达到713.52 mg/L,为下游高效合成酪氨酸衍生物提供了底盘。研究his标签对外源基因表达效率的影响,分别构建了对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸合成模块。优化阿魏酸合成中甲基供体的供应,对合成模块与酪氨酸底盘菌株进行适配性研究。以葡萄糖为碳源,发酵24 h,对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸的产量分别达到424.24 mg/L、147.22 mg/L和50.97 mg/L。优化和改造松柏醇合成模块,获得最优的基因排布顺序。与上游阿魏酸合成模块组合,研究与底盘菌株的适配性。以葡萄糖为碳源,发酵24 h,并优化发酵过程和培养基条件,在大肠杆菌中从头合成松柏醇166.24 mg/L。在本文中,使用合成生物学和代谢工程策略,构建了一株高产酪氨酸的底盘菌株,并优化对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸和松柏醇的合成模块,为大肠杆菌中合成其他重要L-酪氨酸衍生物提供了新思路。
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