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慢性病毒性肝炎和肝硬化是威胁人类健康的两种最主要的肝脏疾病。由于乙型肝炎疫苗的发明和普及应用,丙型肝炎在慢性病毒性肝炎的发病中发挥越来越重要的作用。因此,丙型肝炎的预防和肝硬化的治疗成为肝病学者面临的两个最重要的任务。本文对这两个重要问题进行了初步的探讨。 第一部分:双链RNA和HCV NS3蛋白免疫小鼠可增强细胞免疫反应 背景和目的:双链RNA是病毒复制过程中细胞内产生的一种特殊的RNA分子,它可以通过Toll蛋白样受体3通道来诱导机体抗病毒免疫。HCV NS3蛋白与HCV的免疫逃逸有关,也是抗HCV感染免疫的主要目标之一。方法:小鼠用NS3重组蛋白(rNS3)和poly(I:C)混合并与Montanide ISA 720(M720)乳化后免疫小鼠。小鼠脾淋巴细胞细胞因子的产生用ELISPOT方法检测,CD4~+ IFN-γ~+T辅助细胞和CD8~+ IFN-γ~+细胞毒T淋巴细胞(CTL)用流式细胞仪进行检测。抗-HCV NS3抗体效价及IgG2a和IgG1的含量用ELISA方法检测。结果:细胞因子产生情况的分析表明,用rNS3与poly(I:C)和M720复合疫苗可以诱导更多的IFN-γ分泌细胞,数倍于IL-4分泌细胞,证明该疫苗可以诱导Th1主导的免疫反应。而不加poly(I:C)的rNS3与M720复合疫苗可以诱导Th2主导的免疫反应。rNS3与poly(I:C)和M720复合疫苗诱导的IFN-γ分泌细胞数量显著多于仅用rNS3、rNS3与M720乳化或rNS3与poly(I:c)混合疫苗免疫者,而与用rNS3与CpG和M720复合疫苗诱导的IFN-γ分泌细胞数量相当。另外,rNS3与poly(I:C)和M720复合疫苗诱导的CD8~+ IFN-γ~+ T细胞百分比与rNS3与CpG和M720复合疫苗所诱导的相当,这种CD8~+T细胞免疫反应可以持续7个月以上。结论:Poly(I:C)与rNS3和M720复合疫苗可通过交叉启动诱导强而持久的CTL反应和Th1主导的免疫反应。本研究提出了一种深具潜力的疫苗,它可以在小鼠实验中诱导增强的抗HCV细胞免疫,有发展为临床应用的HCV疫苗的潜力。 第二部分:细菌胶原酶门静脉灌注逆转兔实验性肝硬化 背景和目标:肝硬化的消退与肝内胶原降解酶活性升高有关。本文试图研究通过门静脉补充胶原酶是否可延缓肝硬化的形成,并逆转已形成的肝硬化。