【摘 要】
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第一部分 斑马鱼成鱼癫痫造模目的:探索戊四唑点燃斑马鱼成鱼癫痫模型的最佳诱导浓度。方法:随机选取30尾3月龄野生型AB品系斑马鱼,置于250 m L烧杯中,每杯放置1尾斑马鱼,每杯容量为100 m L,每实验组均处理5尾斑马鱼。分别水溶给予戊四唑5、10、15、20和25 m M,同时设置正常对照组（养鱼用水处理斑马鱼）。处理20 min后,用网络硬盘录像机记录斑马鱼5 min内的运动情况以及癫痫
【基金项目】
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国家自然科学基金委员会（编号:81674022）；
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第一部分 斑马鱼成鱼癫痫造模目的:探索戊四唑点燃斑马鱼成鱼癫痫模型的最佳诱导浓度。方法:随机选取30尾3月龄野生型AB品系斑马鱼,置于250 m L烧杯中,每杯放置1尾斑马鱼,每杯容量为100 m L,每实验组均处理5尾斑马鱼。分别水溶给予戊四唑5、10、15、20和25 m M,同时设置正常对照组（养鱼用水处理斑马鱼）。处理20 min后,用网络硬盘录像机记录斑马鱼5 min内的运动情况以及癫痫样行为,用Etho Vision XT动物行为学分析软件进行视频分析并采集数据,分析斑马鱼的总运动距离（S）、平均速度（V）和癫痫期时间（T）,以总运动距离、平均速度和癫痫期时间的统计学分析结果确定戊四唑诱导癫痫的最佳浓度。结果:在戊四唑诱发成鱼癫痫后,总运动距离和平均速度指标均减少;癫痫期时间指标明显增加,且在5 m M浓度时斑马鱼癫痫行为最佳。第二部分 熄风胶囊/全蝎对斑马鱼成鱼癫痫模型的生殖毒性和发育毒性评价目的:1.熄风胶囊和全蝎的最大耐受浓度（MTC）测定;2.熄风胶囊和全蝎对斑马鱼的生殖毒性和发育毒性评价。方法:1.随机选取受精后4个月（4 mpf）野生型AB品系斑马鱼于2 L繁殖缸中,除正常对照组和溶剂对照组外,其余各实验组均水溶给予PTZ建立斑马鱼癫痫模型,每隔10天暴露一次PTZ。分别水溶给予熄风胶囊125、250、500、1000和2000μg/m L浓度、全蝎15.6、31.3、62.5、125和250μg/m L浓度,同时设置正常对照组（暴露于养鱼水中）、溶剂对照组（1%DMSO）和模型对照组。每组20尾,雌雄各半,分缸养殖,每缸容量为1.2 L。28℃处理7天后,统计各实验组的斑马鱼死亡数量与毒性情况,确定熄风胶囊和全蝎最大耐受浓度（MTC）。2.随机选取受精后4 mpf野生型AB品系斑马鱼于2 L繁殖缸中,除正常对照组合溶剂对照组外,其余各实验组均水溶给予PTZ建立斑马鱼癫痫模型,每隔10天暴露一次PTZ。分别水溶给予熄风胶囊125、250和500μg/m L浓度、全蝎15.6、31.3和62.5μg/m L浓度,同时设置正常对照组（暴露于养鱼水中）、溶剂对照组（1%DMSO）和模型对照组。每组20尾,雌雄各半,分缸养殖,每缸容量为1.2 L。28℃处理21天后,评价样品对斑马鱼F0代和F1代的影响:1)生殖力评价:每周观察记录产卵量;2)子一代发育毒性和致畸性评价:将雄鱼与雌鱼1:1配对产卵,将所产胚胎孵育至一定阶段,从各实验组所产胚胎中随机挑选10尾斑马鱼幼鱼在显微镜下观察,统计毒性发生率并拍摄典型图片。评价器官与组织:心脏、循环系统、出血和血栓、脑、下颌、眼、肝脏、肾脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、身体着色、体长;3)体重、体长、性腺的重量评价:处理21天后,分别测量并统计（1）体长、（2）体重、（3）精巢和卵巢的重量;4)VTG含量检测:处理21天后,采集斑马鱼头部和尾部,用Elisa方法测定VTG含量。结果:1.熄风胶囊在125-500μg/m L浓度时,均未引起斑马鱼死亡,且未见明显异常,在1000和2000μg/m L浓度时分别诱发5.0%（1/20尾）和30.0%（6/20尾）斑马鱼死亡,且较模型对照组状态严重;全蝎在15.6-62.5μg/m L浓度时,均未引起斑马鱼死亡,且未见明显异常,在125和250μg/m L浓度时诱发15.0%（3/20尾）和20.0%（4/20尾）斑马鱼死亡,且较模型对照组状态严重;故确定熄风胶囊和全蝎对癫痫模型斑马鱼的MTC分别为500和62.5μg/m L。2.在熄风胶囊125、250和500μg/m L和全蝎15.6、31.1和62.5μg/m L浓度条件下对斑马鱼生殖力有明显影响,卵巢发育缓慢,对斑马鱼体重、体长、精巢重量和卵巢重量无明显影响。同等浓度条件下,熄风胶囊可增加斑马鱼体内VTG含量,全蝎对斑马鱼体内VTG含量未见明显影响。在实验终点,熄风胶囊和全蝎各浓度组均未产卵,无法进行子一代发育毒性与致畸性评价。结论:1.戊四唑诱导斑马鱼成鱼模型最佳浓度为5 m M。2.熄风胶囊和全蝎对癫痫模型斑马鱼的MTC分别为500和62.5μg/m L。3.在实验终点,熄风胶囊和全蝎各浓度组均未产卵,无法进行子一代发育毒性与致畸性评价。4.熄风胶囊和全蝎干预斑马鱼癫痫模型的生殖毒性体现在各浓度条件下,熄风胶囊组和全蝎组与正常对照组、模型对照组、溶剂对照组相比产卵量均减少。熄风胶囊组和全蝎组与正常对照组、模型对照组、溶剂对照组相比,斑马鱼成鱼的体长,体重,性腺重量无明显影响;熄风胶囊组各浓度条件下成熟卵细胞比例均降低,全蝎15.6和31.3μg/m L浓度组性腺病理组织切片未见明显异常;62.5μg/m L浓度组成熟卵细胞比例降低;熄风胶囊组斑马鱼体内VTG含量明显增高,全蝎组斑马鱼体内VTG含量未见明显影响,提示熄风胶囊和全蝎均降低斑马鱼生殖力,导致斑马鱼雌鱼卵巢发育缓慢。
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