充血性心力衰竭（Chronic congestiveheart failure，CHF）是各类心血管系统疾病发展的最终病理结果，CHF的病理主要表现在三个方面：心肌细胞肥大与凋亡，心肌成纤维细胞增殖以及细胞外基质的病变。迄今为止，CHF的发病率和死亡率均未见明显降低。大量研究资料提示，醛固酮（Spiro）在CHF发病进程中具有重要的病理意义，但其信号分子机制尚未阐明。研究CHF病变的分子机制，研发治疗效果明确，副作用少，且能延缓或逆转心肌重构的药物对降低心力衰竭的发病率、死亡率，提高生活质量都具有十分重要的意义。　　氧化苦参碱（Oxymatrine,OMT）是从豆科槐属植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根中提取的四环喹嗪啶类生物碱，其药理活性十分广泛，本课题组前期实验研究发现氧化苦参碱具有改善急性心肌梗死、抑制心肌纤维化的作用　　本实验采用醛固酮(Aldosterone，ALD)诱导心肌细胞损伤模型，探讨心肌重构相关机制及氧化苦参碱和螺内酯的干预作用。　　一、研究目的：研究ALD诱导体外培养SD新生乳鼠心肌细胞损伤过程中盐皮质激素受体(分钟eralocorticoid receptor，MR)、醛固酮合酶（CYP11B2）及TGF-β/Smad信号通路的改变，阐明氧化苦参碱（OMT）对ALD诱导心肌细胞损伤的保护作用及对MR、CYP11B2及TGF-β/Smad信号通路的调控机制。　　二、研究方法：采用0.06％胰酶消化、差速贴壁法分离纯化1-3 d SD新生大鼠心肌细胞做原代培养。在倒置显微镜观察细胞形态学改变，通过心肌细胞特异性肌钙蛋白（Cardiac Troponin）和肌动蛋白（α-Actin）免疫细胞化学鉴定心肌细胞及其纯度。采用 MTT法观察不同浓度的ALD对心肌细胞的影响，探索 ALD作用于心肌细胞的最佳作用浓度及效应与时间的关系。正式试验分为8组，空白对照组(Ctrl.)、模型组(ALD，16 m克/L)、OMT高剂量组(OMT-H，0.1 mg/毫升)、低剂量组(OMT-L，0.05 mg/毫升)、螺内酯(Spiro，5?M)、Calpeptin组(Calpeptin，1.25?M)、EGTA组(EGTA，0.025 mM)及ALK5小分子抑制剂组(ALK5，5?M)。Giemsa、HE染色法观察各组心肌细胞形态学的变化；MTT法检测细胞的存活率;LDH外漏率分析细胞膜损伤程度。RT-PCR分析 MR、TGFβ-R I(transforminggrowthfactor-beta receptor typeI,TGFβ-RI)、Smad3、Smad7基因表达；Western blotting分析MR、CYP11B2、TGFβ-RI、Smad2、Smad3、Smad4、Smad6及Smad7蛋白表达。　　三、研究结果：MTT及LD小时外漏率证实ALD(16 m克/L)可诱导心肌细胞损伤。HE、Giemsa染色证实OMT、Spiro、EGTA、Calpeptin、ALK5小分子抑制剂组可以有效的抑制ALD诱导的心肌细胞损伤。RT-PCR实验结果提示OMT、Spiro、EGTA、Calpeptin、ALK5小分子抑制剂可以抑制ALD所致的心肌细胞MR、T克Fβ-RI、Smad3基因表达的上调及Smad7基因表达的下调。Western Blotting实验结果证实，OMT、Spiro、Calpeptin可以抑制 ALD所致的心肌细胞 MR、CYP11B2、TGFβ-RI、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的上调及Smad6、Smad7蛋白表达的下调；ALK5小分子抑制剂抑制MR、CYP11B2、TGFβ-RI、Smad2、Smad4蛋白表达的上调及Smad6、Smad7蛋白表达的下调；EGTA抑制MR、CYP11B2、TGFβ-R I、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的上调及Smad6蛋白表达的下调。　　四、研究结论：ALD诱导心肌细胞肥大及损伤可能与MR、CYP11B2、TGFβ-R I及TGF-β/smad下游信号转导途径中的Smad2、3、4、6、7的蛋白表达密切相关；OMT、Spiro均可抑制ALD诱导的心肌细胞的肥大及损伤，其作用机制可能与MR、CYP11B2、TGFβ-RI及TGF-β/Smad下游信号转导途径中的Smad2、3、4、6、7的蛋白表达密切相关。