LY-EC诱导肝细胞毒性的体外试验研究

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目的:在体外试验系统,探讨浏阳霉素乳剂(Liuyangmycin emulsifiable concentrate,LY-EC)对L-02肝细胞抗氧化系统及线粒体能量代谢的影响,为进一步研究浏阳霉素肝损害的毒性机制奠定实验基础。方法:用L-02肝细胞为受试细胞,通过MTT试验检测LY-EC对L-02肝细胞存活率的影响,在>60%细胞存活率的浓度下设置6个试验组即100mg/L、25mg/L、6.25mg/L、1.56mg/L、0.39mg/L LY-EC处理组和1个对照组,LY-EC处理细胞时间为12h。用化学比色法测定谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、肝细胞线粒体琥珀酸脱氢(SDH)、细胞膜ATP酶、谷胱甘肽—S转移酶(GST)活性和线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度;用高效液相色谱法检测不同浓度LY-EC对肝细胞中腺苷酸(ATP,ADP,AMP)含量的影响,并分析ATP/ADP比值以及负荷能量(EC)的变化;电镜观察高、中浓度LY-EC对线粒体超微结构的影响。结果:在100mg/L-0.39mg/L处理浓度范围,LY-EC对L-02肝细胞具有明显细胞毒性,其细胞存活指数与LY-EC处理浓度呈负明显相关(r=-0.939)。LY-EC处理的肝细胞与对照组比较,其细胞SOD、SDH、ATP酶与GST活性显著降低(P<0.05),线粒体PTP开放度与MDA含量明显增加(P<0.05),并观察到明显的浓度-效应关系。染毒组肝细胞内GSH、总腺苷酸含量(TAN)、ATP/ADP比值与对照组比较显著降低(P<0.05),LY-EC处理组Ec值与对照组比较明显增加(P<0.05),但均未观察到明显的浓度-效应关系。电镜观察发现LY-EC高、中浓度染毒组肝细胞胞浆水肿,线粒体肿胀变形,嵴不完整甚至消失,内质网扩张,严重者出现空泡样变,周围积聚大量的溶酶体,发生膜破裂。结论:LY-EC对L-02肝细胞存在氧化损伤作用;对L-02肝细胞线粒体能量代谢存在抑制作用。
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