LncRNA RP11-46C24.7在脑胶质瘤和脑胶质瘤干细胞中的功能

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目的:探究Lnc RNA RP11-46C24.7在脑胶质瘤和脑胶质瘤干细胞中的功能。方法:1.采用无血清富集脑胶质瘤干细胞。2.查阅相关文献,运用q RT-PCR的方法在脑胶质瘤和脑胶质瘤干细胞中筛选出具有表达差异的lnc RNAs,并从中选出表达差异比较明显的lnc RNA RP11-46C24.7。以lnc RNA RP11-46C24.7为研究对象,探究其在脑胶质瘤和脑胶质瘤干细胞中的功能。3.用慢病毒包装,构建稳态株的方法,在U87、U251细胞中构建lnc RNA RP11-46C24.7低表达稳态株。4.通过CCK8、克隆能力形成、细胞周期、细胞凋亡、Transwell、细胞划痕等实验,检测lnc RNA RP11-46C24.7对脑胶质瘤细胞的增殖、迁移的影响。5.运用q RT-PCR、干细胞成球实验的方法,检测lnc RNA RP11-46C24.7对脑胶质瘤干细胞的干性、成球能力和生长的影响。结果:1.采用无血清培养基加生长因子EGF、b FGF、B27成功富集出脑胶质瘤干细胞。2.q RT-PCR检测lnc RNA RP11-46C24.7在GSCs的表达量高于脑胶质瘤细胞。3.利用慢病毒感染的方法在U87和U251细胞中成功建立lnc RNA RP11-46C24.7稳定低表达细胞株。4.CCK8方法和克隆形成实验检测下调lnc RNA RP11-46C24.7的表达量,明显降低了U87和U251细胞的增殖能力和克隆形成能力。5.使用流式细胞仪分析减少lnc RNARP11-46C24.7的表达,脑胶质瘤细胞周期G0/G1期细胞百分比显着增加,S期细胞百分比降低。6.采用流式细胞仪检测了下调lnc RNA RP11-46C24.7的表达,使脑胶质瘤细胞凋亡数增加3倍左右。7.细胞划痕和transwell实验检测下调lnc RNA RP11-46C24.7的表达,降低了脑胶质瘤细胞迁移能力。8.使用之前构建好的低表达lnc RNA RP11-46C24.7 U87和U251细胞稳态株在无血清培养基中成功富集低表达GSCs。9.采用q PCR检测下调lnc RNA RP11-46C24.7的表达,降低了干细胞表面分子标志物CD133和Nestin在m RNA水平上的表达量。10.干细胞成球实验结果下调lnc RNA RP11-46C24.7表达,脑胶质瘤干细胞球直径变短。结论:抑制lnc RNA RP11-46C24.7的表达,可以明显降低脑胶质瘤细胞的增殖能力,加快细胞的凋亡,同时降低脑胶质瘤细胞的迁移能力。干细胞成球实验显示,下调lnc RNA RP11-46C24.7的表达,抑制了干细胞的干性,减慢了脑胶质瘤干细胞的生长和自我更新能力。
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