雌性济宁青山羊生后性发育特性与雌孕激素及其受体关系的研究

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济宁青山羊是我国一个优秀地方品种,具有性成熟早和繁殖率高的特点。从激素和受体表达水平等角度研究青山羊性发育过程,对于阐明济宁青山羊性成熟早的机理和培育新的高繁殖力山羊品种或品系等具有重要意义。本研究以雌性济宁青山羊为研究对象,应用放射免疫、组织化学、免疫组织化学、透射电镜、实时荧光定量PCR和WesternBlot等方法,从激素水平、细胞水平、亚细胞水平和分子水平等层面系统研究从出生到性成熟山羊血液中雌孕激素的波动、雌孕激素受体在下丘脑-垂体-卵巢轴以及雌孕激素受体在生殖器官发育过程中的增龄性分布特点及变化规律。研究结果显示,在雌性济宁青山羊生后发育阶段:①下丘脑与生殖有关的核团均有ER和PR阳性细胞分布,各核团ERα、ERβ和PR阳性细胞随日龄增长而数量增多,且同一日龄同一核团内ERβ阳性着色明显强于ERα(p<0.05)。PR免疫反应阳性神经元的分布和变化规律与ERβ基本一致。ERα、ERβ和PR阳性细胞在下丘脑中分布的增龄性变化与济宁青山羊性发育和性早熟的特点密切相关;②腺垂体嗜色细胞随着年龄增长而数量增多,体积增大;ERα主要分布于嗜色细胞的细胞核,ERβ和PR主要分布于部分嗜色细胞的细胞质;初情期(D60),垂体嗜色细胞进入形态学快速生长期,ERα和ERβ的表达明显上调。PR阳性细胞AOD的峰值出现在D120,此时青山羊已达性成熟,PR的高表达与垂体的功能状态同步;③卵巢具有发育快和成熟早的特点,初生母羔的卵巢内即有生长卵泡,ERα、ERβ和PR的合成及其mRNA的表达均较高。出生至30日龄,为卵巢形态上的快速生长发育期,重量和体积均显著增加,内、外皮质区的分带消失。60~90日龄,为卵巢机能上的发育完善时期。60日龄已排卵,出现黄体或白体,进入初情期,ERα、ERβ和PR及其mRNA的表达明显上调;90日龄为性成熟期,成熟卵泡最大直径可达6.18mm;除ERα表达下调外,ERβ和PR及其mRNA的表达均维持在高水平状态。初情期之前,卵巢雌激素的优势受体为ERα,性成熟后则为ERβ;④不同日龄子宫内均有ERα、ERβ和PR及其mRNA的表达。ERα、ERβ和PR蛋白免疫阳性产物定位于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞的核中。ERα和ERβ表达从60日龄明显增多,90日龄最多。出生以后,PR出现两个高峰点是120日龄和180日龄。ER和PR及其mRNA在出生后不同发育阶段子宫内的分布及表达状况,为山羊的多胎性提供良好的子宫内环境;⑤输卵管壶腹部和伞部上皮内存在ERα、ERβ、PR、FSHR和LHR,并且这些受体在输卵管上皮发育过程中的表达具有时空特异性。性成熟前(D0~D60),山羊下丘脑-垂体-卵巢轴尚未发育成熟,输卵管壶腹部和伞部上皮中ERα、ERβ、PR、FSHR和LHR的表达少,阳性细胞积分光密度值低,性成熟(D90~D180)后,输卵管上皮中ERα、ERβ、PR、FSHR和LHR的表达升高,激素受体与配体结合进而调节输卵管上皮细胞的分化发育,使壶腹部和伞部上皮中纤毛细胞和分泌细胞的数量增多,上皮细胞含有的糖原或粘液增多,上皮功能更加活跃。D150开始在壶腹部和伞部上皮的游离缘出现“腔排”现象,“腔排”物为全浆分泌的分泌细胞。
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