轮状病毒致乳鼠感染后IFN-γ/IL-17水平及肠道外损伤的研究

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目的:建立BALB/c乳鼠肠道感染轮状病毒(Rotavirus,RV)的动物模型,检测血Th1细胞因子(IFN-γ)和Th17细胞因子(IL-17)的水平,动态比较两细胞因子在不同时间点变化的差异性,进一步探讨RV感染后机体的细胞免疫过程及相关细胞因子的关系,深入了解RV感染的免疫病理特点,为临床防治RV感染及肠道外损伤寻找新的办法。方法:以恒河猴胚肾细胞(MA-104)培养猴RVSA-11株,扩增,组织细胞半数感染量(TCID50)法测定病毒滴度,分装,-80℃冰箱保存备用。实验动物选用清洁级BALB/c乳鼠60只,日龄3-5日,雌雄各半,随机分为两组,每组30只,即实验组(RV感染模型组):胃内灌入100ul(1×10-4)TCD50感染性滴度的SA-11株RV;空白对照组:胃内灌入100ulNS。病毒接种后,各组动物隔离饲养。接种当天以第0天计,接种后每天观察乳鼠的活动情况、有无皮肤脱水、肛门红肿、腹部鼓胀、体型、饮食情况及大便变化情况等,收集大便经胶体金法检测RV抗原。分别在接种后的第3天和第8天(每组各15只),活体摘除眼球取血各约0.5ml,血标本4000转/分钟离心20分钟留取血清(每个标本血清约50-100ul),经酶联免疫分析(ELISA)检测细胞因子IFN-γ和IL-17水平。处死乳鼠,留取肝脏、心脏等放置福尔马林内固定,苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察形态学改变。结果:1、RVSA-11株在MA-104细胞内增殖良好,感染后24h即可出现病变,72h病变可达到(+++~++++),组织细胞半数感染量法滴定所收集的病毒液,滴度TCID50为10-4。2、实验组乳鼠表现为食欲不振,活动减少,皮肤干燥、嗜睡、对刺激反应差、腹胀、腹泻症状(大便软、稀薄样便)等,第3~4天达到顶峰,至第8天精神状况好转。对照组乳鼠一直保持正常情形,皮肤弹性可,对刺激反应灵敏,食欲正常,精神活跃,大便正常。3、感染后第3天实验组IFN-γ水平明显高于对照组(P﹤0.01),第8天时水平与正常对照组比较未见显著差异(P﹥0.05);感染后第3天实验组IL-17水平与正常对照组比较未见显著差异(P﹥0.05),第8天时水平明显高于对照组(P﹤0.05)。4、光镜下实验组乳鼠第3天大部分肝细胞肿胀,中、重度空泡变性,灶状LC浸润;心肌细胞浊肿,心肌间质水肿,心内膜、心肌层LC浸润,第8天时个别肝脏细胞稍肿胀,轻度空泡变性,心肌细胞大致正常。对照组肝脏及心脏病理未见明显改变。结论:BALB/c乳鼠感染RV动物模型建立成功。乳鼠感染RV尤其在早期以IFN-γ表达为主,且伴有不同程度的肠外脏器损害,但总体上程度轻。而后期IL-17应答占优势,说明IL-17可能在RV的控制上起一定作用,且对肠外脏器的损害有一定修复作用。为外源性IL-17预防、治疗RV感染提供依据。
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