本文采用程序降温法对香港牡蛎精子进行超低温冷冻保存研究,通过对不同稀释液、抗冻剂、平衡时间、稀释比、冷冻体积、冷冻程序和复苏方法的筛选,建立了一套成熟的香港牡蛎精子冷冻保存技术。通过对冷冻前后精子的存活率、活力、受精率的测定及精子超微结构的观察,来评价该技术对精子冷冻保存的效果。为香港牡蛎优良种质的长期保存提供科学依据和技术支持。本研究主要结果如下：1、4℃低温保存香港牡蛎精子较25℃保存相同时间的活力更强,精子体外存活时间更长。2、在精子冷冻保存稀释液和抗冻剂的筛选中,柠檬酸钠-甘氨酸溶液作为稀释液保存香港牡蛎精子存活率最高,为82.90±0.19%,生理盐水次之为77.57±0.49%；抗冻剂选用DMSO,其复苏后精子存活率显著高于选用甘油和甲醇,其中生理盐水为稀释液时DMSO最佳浓度为14%,柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液时DMSO最佳浓度为12%；海藻糖和DMSO联合作为抗冻剂时,以生理盐水为稀释液的海藻糖最佳浓度为0.25mol/L,以柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液的海藻糖最佳浓度为0.15mol/L。3、不同降温程序对香港牡蛎精子超低温冷冻保存差异显著,程序Ⅳ降温后复苏精子活力最强(生理盐水为稀释液精子活力为81.31±6.61%,柠檬酸钠-甘氨酸为稀释液精子活力为78.23±5.17%),其次是程序Ⅱ(生理盐水为稀释液精子活力为70.05±6.32%,柠檬酸钠-甘氨酸为稀释液精子活力为69.88±1.57%)。4、两种不同稀释液情况下,精液与抗冻保护液均以稀释比为1：40时,复苏后精子存活率和活力均为最高。不同冷冻体积对复苏后冻精存活率差异不显著,相同稀释液的不同冷冻体积保存的精子复苏后存活率差异不显著,不同稀释液之间差异也不显著。冷冻前不同平衡时间冻精复苏后精子存活率差异不显著,但两种稀释液均在平衡30min时冻精复苏后存活率最高。5、复苏温度为35℃时两种稀释液冻精存活率均达最高值(生理盐水组81.76±1.97%,柠檬酸钠-甘氨酸组78.57±3.28%),但25～30℃和40-50℃之间差异不显著。冻精复苏后精卵比为40：1时受精率接近鲜精水平(受精率为81.24±2.64%)。复苏后精子不能用天然海水激活,而需要终浓度为0.3125‰的氨海水激活。6、精子超低温冷冻及升温复苏对精子结构的影响主要表现为：被膜肿胀、皱缩、破裂；顶体膜肿胀、局部破裂,顶体全部或部分消失；核膜肿胀、变形、空泡化甚至破裂分解；球形的线粒体结构松散甚至脱落,线粒体缺失内容物溶出,内嵴结构疏松；精子鞭毛被膜肿胀,鞭毛自精子基部或中段断裂,尾部接近线粒体部分膨胀,严重弯曲变形。