RNA干扰抑制骨髓瘤SP2/0细胞nm23-M1基因表达的体外实验研究

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目的:建立RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制nm23-M1基因表达的骨髓瘤SP2/0细胞株,初步探讨nm23-M1基因表达对小鼠骨髓瘤SP2/0细胞增殖和侵袭的影响。方法:1针对nm23-M1 mRNA序列设计3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,分别构建表达这3个序列及阴性对照序列的pGenesil-1重组质粒。2将重组质粒分别以脂质体转染至小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,并经G418抗性筛选得到稳定表达细胞株。3采用半定量RT-PCR及Western印迹检测3个稳定表达细胞株和阴性对照细胞中nm23-M1 mRNA及蛋白质的表达情况,判断其抑制效果并筛选出最佳的一组siRNA,并建立相应的稳定表达细胞株。4用MTT及Transwell小室侵袭实验观察RNA干扰抑制nm23-M1基因表达对SP2/0细胞增殖和侵袭的影响。结果:1成功构建了表达siRNA的重组质粒pGenesil-1-nm23-M1及表达阴性对照序列的重组质粒。2半定量RT-PCR及Western印迹结果显示,设计的3条siRNA不同程度地特异抑制骨髓瘤SP2/0细胞nm23-M1 mRNA及蛋白质的表达,其中siRNA-2抑制作用最强,其对nm23-M1 mRNA和蛋白质的抑制率分别为74.4%和62.1%。3筛选得到了抑制nm23-M1基因表达抑制率最高的稳定表达细胞株。4 MTT结果显示siRNA-2抑制nm23-M1基因表达后SP2/0细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05);Transwell小室侵袭实验显示细胞侵袭能力减弱不明显(P>0.05)。结论:1成功构建了表达设计的siRNA序列和对照组序列的重组质粒。2筛选出了抑制nm23-M1基因表达效果最佳的一组siRNA,并建立和筛选得到能稳定而有效抑制nm23-M1基因表达的骨髓瘤SP2/0细胞株。3抑制nm23-M1基因表达后,骨髓瘤细胞增殖显著受到了抑制,初步证实nm23-M1基因在细胞的生长、分裂过程所起的重要作用,也证实了该基因可作为一种造血系统肿瘤细胞增殖的标志物。4抑制nm23-M1基因表达后,骨髓瘤细胞侵袭能力的变化不明显,其原因和机制还有待深入研究,nm23-M1基因对骨髓瘤细胞侵袭能力的作用也还需进一步研究。
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