【摘 要】
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新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染导致的禽类烈性、高度接触性传染病。目前亚洲流行的主要NDV毒株为基因Ⅶ型,而我国目前广泛使用的ND疫苗基于基因II型La Sota株制备。NDV的融合（F）基因和血凝素-神经氨酸酶（HN）基因是ND疫苗发挥作用的重要保护性抗原。NDV F和HN基因的遗传进化分析表明,基因Ⅶ
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新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染导致的禽类烈性、高度接触性传染病。目前亚洲流行的主要NDV毒株为基因Ⅶ型,而我国目前广泛使用的ND疫苗基于基因II型La Sota株制备。NDV的融合（F）基因和血凝素-神经氨酸酶（HN）基因是ND疫苗发挥作用的重要保护性抗原。NDV F和HN基因的遗传进化分析表明,基因Ⅶ型新城疫病毒分离株与II型La Sota疫苗株存在较大差异。与La Sota疫苗株相比,使用基因型匹配的疫苗对Ⅶ型新城疫病毒的感染具有更好的保护作用。传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种高度传染性、免疫抑制性疾病。IBDV主要感染雏鸡的法氏囊,导致法氏囊中的B淋巴细胞大量崩解坏死。近年来,由IBDV新型变异株引起的非典型性IBD给我国养禽业带来严重威胁,此类变异株可逃逸基于经典IBDV毒株疫苗提供的的免疫保护,造成雏鸡严重免疫抑制。IBDV的VP2基因是诱导机体产生抗IBDV中和抗体的重要抗原基因。基因Ⅶ型NDV和IBDV新型变异株的流行给我国养禽业带来巨大的经济损失。因此,本研究在前期利用反向遗传技术将La Sota疫苗株HN、F基因分别替换为Ⅶ型NDV强毒株的HN基因及蛋白酶裂解位点突变的F基因的基础上,在La Sota基因组P、M基因间插入优化合成的IBDV新型变异株的VP2基因,首次构建出表达IBDV新型变异株VP2蛋白的重组嵌合型NDV载体二联候选疫苗rLaS-VIIF/HN-VP2,并对rLaS-VIIF/HN-VP2的免疫原性及免疫效力进行评价。论文包括以下几方面内容:一、含有IBDV新型变异株VP2基因的重组嵌合型NDV构建与鉴定为研发有效防控IBDV新型变异株和基因Ⅶ型NDV感染的廉价高效疫苗,本研究以含有基因Ⅶ型F、HN基因的重组嵌合型La Sota疫苗株为载体,在La Sota基因组P、M基因间插入基于IBDV新型变异株代表株SHG19 VP2基因的优化合成序列,并成功拯救重组NDV rLaS-VIIF/HN-VP2。通过序列测定、Western blotting对rLaS-VIIF/HN-VP2进行鉴定。结果表明,IBDV VP2基因的插入符合预期,VP2蛋白成功表达,第25代重组NDV在鸡胚中的生物学特性研究表明,rLaS-VIIF/HN-VP2保留了La Sota亲本株在鸡胚中高滴度复制、低致病性和遗传稳定性等生物学特性。重组NDV rLaS-VIIF/HN-VP2的鸡胚半数感染量(EID50)峰值可达10-8.16/0.1 m L,鸡胚平均致死时间（MDT）为134 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉接种致病指数（IVPI）均为0。本研究构建的表达IBDV VP2基因的重组NDV rLaS-VIIF/HN-VP2将为研发同时防控我国流行的基因Ⅶ型NDV及IBDV新型变异株感染的高效廉价多联疫苗奠定基础。二、重组NDV rLaS-VIIF/HN-VP2疫苗的免疫原性与免疫效力评价为评价基于rLaS-VIIF/HN-VP2制备的疫苗的免疫原性与免疫效力。将弱毒活疫苗与灭活疫苗分别通过不同免疫途径分别免疫1周龄SPF鸡。免疫后不同时间,利用血凝抑制试验（HI）检测抗Ⅶ型NDV的抗体水平,用IBDV抗体ELISA检测试剂盒检测抗IBDV的抗体水平,用病毒中和试验测定血清中抗IBDV的中和抗体效价。结果表明,基于rLaS-VIIF/HN-VP2的弱毒活疫苗和灭活疫苗均可提供鸡只针对基因Ⅶ型NDV与IBDV变异株感染的完全保护作用,且弱毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗。研究表明,rLaS-VIIF/HN-VP2可以作为种毒制备预防IBDV新型变异株及基因Ⅶ型NDV中国流行株感染的廉价高效二联疫苗。
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