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目的:通过比较研究3、6、12月龄雄性小鼠肝脏蛋白质组的变化规律及四首补益剂对不同月龄小鼠差异蛋白的调节作用,初步阐明四首补益剂与增龄不同阶段相关证候的生物学基础,为全面解析衰老发生机制与防治措施提供新的理论依据和数据支持。方法:选取3月龄雄性ICR小鼠10只为青年对照组,6、12月龄雄性ICR小鼠各60只随机为四君子汤组、四物汤组、六味地黄丸(汤)组、金匮肾气丸(汤)组、维生素E组、空白对照组,每组10只,各给药组采用灌胃给药方式干预,青年对照组、6月空白组与12月空白组灌胃同体积比生理盐水。于给药第3 1天处死小鼠,取出肝脏,液氮速冻后立即转于零下80℃冰箱冻存备用。提取肝脏线粒体,以 iTRAQ技术为基础,联合LC-MS/MS质谱分析,通过UniProt release(2016-07)数据库筛选差异蛋白,对以上各组差异蛋白进行GO分析、KEGG pathway分析,对各组差异蛋白进行交集处理,以进一步筛选蛋白标志物。结果:空白组中3月龄与6月龄小鼠共鉴定到358个差异蛋白;6月龄与12月龄小鼠共鉴定到347个差异蛋白;3月龄与12月龄小鼠共鉴定到365个差异蛋白。6月龄组中四君子汤组与空白组鉴定到443个差异蛋白;四物汤组与空白组鉴定到412个差异蛋白;六味地黄丸(汤)组与空白组鉴定到406个差异蛋白;金匮肾气丸(汤)组与空白组鉴定到364个差异蛋白;维生素E组与空白组鉴定到370个差异蛋白。12月龄组中四君子汤组与空白组鉴定到336个差异蛋白;四物汤组与空白组鉴定到340个差异蛋白;六味地黄丸(汤)组与空白组鉴定到402个差异蛋白;金匮肾气丸(汤)组与空白组鉴定到373个差异蛋白;维生素E组与空白组鉴定到338个差异蛋白。经分析共筛选出97个与增龄的蛋白标志物,分别与空白组对比分析,各药物组有效调节的与其作用相关的差异蛋白,四君子汤组共32个,四物汤组共36个,六味地黄丸(汤)组共30个,金匮肾气丸(汤)共26个;维生素E组影响的与增龄相关的蛋白共8个。对97个与增龄相关的差异蛋白进行GO分析,发现共54个差异蛋白富集于35个与生长发育相关的生物学过程。其中四君子汤参与调节与生长发育相关的差异蛋白2 1个,四物汤参与调节与生长发育相关的差异蛋白24个,六味地黄丸(汤)参与调节与生长发育相关的差异蛋白17个,金匮肾气丸(汤)调节与生长发育相关的差异蛋白11个。对各组差异蛋白进行交集处理,四君子汤与四物汤共同调节的差异蛋白24个;六味地黄丸(汤)与金匮肾气丸(汤)共同调节的差异蛋白9个;金匮肾气丸(汤)与四君子汤共同调节的差异蛋白3个;六味地黄丸(汤)与四物汤共同调节的差异蛋白1个。结论:本文通过蛋白质组学技术研究3、6、12月龄ICR雄性小鼠肝脏中蛋白质组的改变,探寻增龄过程与生长发育相关的蛋白标志物,在此基础上,以四首补益剂为探针,通过分析四首补益剂对不同月龄小鼠蛋白质组的干预作用,探索增龄与气血阴阳失衡的相关性,得出以下结论:1.增龄过程机体的稳态逐渐失衡,本次实验中共鉴定到97个与增龄相关的差异蛋白,主要与机体的PI3K-Akt信号通路、脂肪酸代谢、过氧化物酶体合成通路、癌症通路、ECM-受体相互作用、PPAR信号通路、泛素-蛋白酶体系统、胰岛素信号通路、mTOR信号通路、长寿调节通路等相关。2.四君子汤、四物汤、六味地黄丸(汤)、金匮肾气丸(汤)可分别通过补气、补血、补阴、补阳的作用调节小鼠在增龄过程蛋白质组的改变。2.1补气方四君子汤调节的32个差异蛋白,主要富集于PI3K-AKT信号通路、过氧化物酶体通路、蛋白酶体、长寿调节通路、ECM受体相互作用等通路,改善了因增龄出现的与补气作用相关的生物学变化。2.2补血方四物汤调节的36个差异蛋白,主要富集于PPAR信号通路、FOXO信号通路、PI3K-AKT信号通路、长寿调节通路等,改善了因增龄出现的与补血作用相关的生物学变化。2.3补阴方六味地黄丸(汤)调节的30个差异蛋白,主要富集于PPAR信号通路、过氧化物酶体合成通路、ECM-受体相互作用通路、脂肪消化吸收通路等,改善了因增龄出现的与补阴作用相关的生物学变化。2.4补阳方金匮肾气丸(汤)调节的26个差异蛋白,主要富集于PPAR信号通路、过氧化物酶体通路、不饱和脂肪酸的生物合成等通路,改善了因增龄出现的与补阳作用相关的生物学变化。3.本实验中鉴定到97个与增龄相关的差异蛋白中,共54个差异蛋白富集于35个与生长发育相关的生物学过程,四首补益剂通过对不同差异蛋白的调节促进了机体的生长发育,其中四君子汤参与调节与生长发育相关的差异蛋白21个,四物汤参与调节与生长发育相关的差异蛋白24个,六味地黄丸(汤)参与调节与生长发育相关的差异蛋白1 7个,金匮肾气丸(汤)调节与生长发育相关的差异蛋白11个。4.对各组差异蛋白进行交集处理,发现四君子汤与四物汤共同调节的差异蛋白24个;六味地黄丸(汤)与金匮肾气丸(汤)共同调节的差异蛋白9个;金匮肾气丸(汤)与四君子汤共同调节的差异蛋白3个;六味地黄丸(汤)与四物汤共同调节的差异蛋白1个,提示气血阴阳之间具有一定内在联系,有待进一步研究。5.通过维生素E对增龄小鼠的干预作用,发现维生素E在蛋白质水平对6月龄、12月龄雄性ICR小鼠不具有明确的调节作用。