氢溴酸常山酮对鲟鱼的急性毒性及其残留检测方法的研究

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常山酮是从植物常山中分离出来的一种喹唑酮类生物碱-常山卤代衍生物,现为合成化学物。本研究进行了氢溴酸常山酮(HAL)对鲟鱼的急性毒性试验;利用兔抗常山酮多克隆抗体与CNBr活化的Seporase 4B制备了免疫吸附剂;并建立了鲟鱼组织中HAL残留检测的高效液相色谱(HPLC)方法。 进行了HAL预混剂对鲟鱼的急性毒性试验。48h、96h急性毒性LD50分别为19.41μg/L、13.63μg/L。按照鱼类急性毒性分级标准,HAL预混剂对鲟鱼属于剧毒。 采用SAS盐析和DEAE-纤维素离子交换层析方法纯化兔抗常山酮多克隆抗体,用紫外分光光度法检测出抗体的浓度。纯化后的抗体IgG与溴化氰活化的琼脂载体Sepharose4B偶联制得免疫吸附剂,其偶联率是97.4%。采用HPLC-UV方法检测,其动态柱容量为1584 ng/mL gel,绝对柱容量为222ng/mg IgG.。在10mL溶液中含1000ng的水平下,标准品平均回收率为99.8%。 建立了HAL在鲟鱼肌肉中残留检测的IAC-HPLC方法。采用胰蛋白酶酶解肌肉中蛋白质,用乙酸乙酯提取,0.125M醋酸胺缓冲液萃取,经IAC柱纯化,40℃蒸干,高效液相色谱(HPLC)检测。探讨了pH对提取液(抗原)和IAC柱(抗体)反应的影响:pH为7.4,抗原和抗体反应完全。3mL的甲醇能完全洗脱柱上吸附的常山酮。在20-200pg/kg添加水平下,样本回收率为74.6-81.0%,变异系数为0.7-8.6%,检测限是10μg/kg。 建立了HAL在鲟鱼肌肉中残留检测的SPE-HPLC方法。除了用SPE(Oasis)柱而不是用IAC纯化浓缩样品外,其它方法步骤与IAC-HPLC一样。在20-200gg/kg添加水平下,样本同收率为67.5-77.5%,变异系数为0.4-15.6%,检测限是15μg/kg。 本论文首次在国内进行了HAL对鲟鱼的急性毒性试验,首次制备了兔抗常山酮多克隆抗体免疫吸附剂,利用免疫亲和色谱(IAC)柱对样品进行前处理,建立了IAC-HPLC检测方法。可用于实际样品中常山酮的检测。
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