论文部分内容阅读
目的:临床中母体患妊高征、肾脏疾病等多种疾病可致胎儿早产。早产儿出生时肺部发育还未成熟,会处于多种不利环境中。本实验通过建立动物模型,分组实验,观察和检测大鼠肺发育情况,从多方面研究低浓度给氧治疗下间歇高氧或缺氧对早产大鼠肺发育的影响及4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶(Tempol)的保护作用。方法:本实验选用妊娠期达15天的Sprague-Dawley大鼠以构建动物模型。(1)苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织在不同给氧条件下的形态学改变。(2)低倍镜下切片观察支气管中心至最近的纤维或胸膜垂直线肺泡数计数,得到肺辐射状肺泡计数(Radical alveolar count,RAC)。(3)BuxCo小动物肺功能实验平台系统检测各组大鼠肺功能情况。(4)使用铁还原抗氧化能力(FRAP)试剂盒检测大鼠总抗氧化能力。(5)采用MDA检测试剂盒,检测肺组织中的MDA。(6)免疫组化检测各组大鼠HIF-1a和VEGF蛋白的表达。使用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测肺组织HIF-1α VEGF mRNA的表达。(7)Western blot检测不同给氧条件下HIF-1a和VEGF蛋白的表达。(8)HE染色观察肺组织,对比有无注射tempol的组间形态学差异。(9)HE染色切片做肺辐射状肺泡计数,对比有无注射tempol的组间RAC差异。结果:(1)间歇高氧、缺氧组大鼠生后14天、21天体重明显低于对照组、恒氧组,肺系数指数明显高于空气对照组。(2)间歇高氧和缺氧组出现多种不良的肺组织病理形态,包括轻微的肺上皮增厚以及较少的隔膜和肺泡分支。(3)初期RAC无明显差异,间歇高氧、缺氧组在14天、21天明显低于对照组和恒氧组。(4)出生21天,间歇高氧和缺氧组肺功能明显低于对照组,而持续氧疗显著增加了早产鼠的肺功能。(5)间歇高氧、缺氧组大鼠肺组织中TAOC较对照组明显减低;而MDA浓度则明显高于对照组。(6)在14和21天,恒氧组和间歇高氧组HIF-1α mRNA和蛋白的表达与对照组相比呈下降趋势,间歇缺氧组则明显上升。(7)注射tempol的两组肺形态上发育比间歇高氧组和缺氧盐水对照组好。(8)使用Tempol的两组生后第14天、21天肺系数指数显著低于间歇高氧、缺氧盐水对照组早产鼠。(9)注射tempol的两组21天RAC与肺功能均显著高于注射生理盐水的间歇高氧和缺氧组。(10)14天、21天,注射tempol的两组肺组织中TAOC较间歇高氧和缺氧组盐水对照组明显增高,MDA浓度则显著减低。结论:早产鼠在低浓度给氧治疗下间歇高氧或缺氧刺激下均会导致总抗氧化能力及肺功能下降,肺组织出现不良病理形态。低浓度给氧治疗下间歇缺氧同样可导致肺组织HIF-1 α/VEGF过表达,影响肺发育。Tempol能在一定水平上恢复低浓度给氧治疗下间歇高氧和缺氧条件下早产鼠降低的总抗氧化能力,改善其不良的肺组织病理形态及肺功能。