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旧的]转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)是一种参与细胞铁摄取和生长调控的跨膜型糖蛋白。TfR高表达于多种肿瘤细胞表面,且其表达水平与肿瘤的分期及预后密切相关。因而,TfR作为肿瘤靶向治疗,尤其是肿瘤抗体治疗中重要的靶分子而倍受国内外学者的关注。体内外实验均证实抗TfR抗体对多种肿瘤细胞具有抗瘤效应。然而,临床实验结果显示,单独应用抗TfR抗体治疗晚期癌症患者效果并不理想。本课题在前期研究工作的基础上,重点探讨抗TfR单克隆抗体(TfR mAb)与盐酸青藤碱单独或联合应用时对肝癌细胞系HepG2的体内外抗瘤效应及其机制,为进一步开展以TfR为靶点的肿瘤化学免疫疗法研究奠定基础。[方法]1.细胞培养人肝癌细胞系HepG2为华中科技大学同济医学院免疫学系保存,于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,37℃、95%湿度、5%CO2细胞培养箱中常规培养;2. PI-Annexin-Ⅴ染色检测肿瘤细胞凋亡：PI-Annexin-Ⅴ染色采用流式细胞术检测抗TfR mAb与盐酸青藤碱单独或联合应用诱导肝癌细胞系HepG2凋亡；3.PI染色检测肿瘤细胞周期：PI染色采用流式细胞术检测抗TfR mAb与盐酸青藤碱单独或联合应用后肝癌细胞系HepG2的周期变化;4.CFSE染色检测肿瘤细胞增殖：CFSE染色采用流式细胞术检测盐酸青藤碱和抗TfR mAbTfR单克隆抗体与盐酸青藤碱单独或联合应用作用后肝癌细胞系HepG2的增殖；5. Western blot:采用western blot检测TfR mAb与盐酸青藤碱单独或联合应用后肝癌细胞系HepG2的COX-2以及VEGF的表达；6.通过体内实验探讨TfR mAb与盐酸青藤碱单独或联合应用时对荷瘤裸鼠肿瘤大小和生存期的影响。[结果]1. TfR mAb抑制肿瘤细胞的增殖,并诱导肿瘤细胞发生S期阻滞和促进凋亡。2.盐酸青藤碱诱导肿瘤细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,使细胞发生S期阻滞,具有浓度和时间依耐性。3. TfR mAb与盐酸青藤碱联合应用时对肝癌细胞系HepG2的凋亡、增殖和周期具有协同作用。4. Western blot结果显示,肝癌细胞系HepG2经抗TfR mAb单独处理后,其COX-2和VEGF的表达增高,且随剂量升高而升高。相反,经盐酸青藤碱单独处理的细胞系,其COX-2的表达随剂量的升高而降低,且呈剂量依赖性。细胞系HepG2经抗TfR mAb与盐酸青藤碱联合处理后,其COX-2和VEGF的表达降低最为显著。5.体内实验结果表明,TfR mAb与盐酸青藤碱联合应用可抑制瘤裸鼠肿瘤的形成和延长其生存期。[结论]研究证明抗TfR mAb与盐酸青藤碱单独应用分别可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖和S期阻滞；首次证明抗TfR mAb与盐酸青藤碱二者联合应用对诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖和S期阻滞具有协同效应。其作用机制可能为二者联合作用可以显著降低HepG2细胞COX-2和VEGF的表达。体内实验研究结果表明,TfR mAb与盐酸青藤碱联合应用对延长荷瘤裸鼠的生存期以及抑制肿瘤形成有一定的协同效应。本研究证明抗TfR mAb与盐酸青藤碱体内外抗瘤协同效应,为进一步开展以TfR为靶点的肿瘤化学免疫疗法研究奠定了良好的基础。