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猪卵母细胞体外成熟经过了几十年的研究,已取得相当大的进展,但是胚胎体外生产和核移植的效率仍然较低,这与卵母细胞成熟质量有着密切的关系,这可能与胞质成熟不同步导致卵母细胞成熟质量差,从而制约着猪体外胚胎生产的效率。本试验通过在体外成熟液中添加PDE3特异性抑制剂cilostamide,抑制卵母细胞核成熟,促进核质成熟同步化,提高卵母细胞的发育能力。第一章为探讨减数分裂抑制剂cilostamide对猪卵母细胞体外成熟的影响。试验首先对cilostamide浓度和抑制时间进行筛选,猪卵母细胞分别在含有0μM、20μM、40μM、60μM cilostamide的IVM培养液中培养11h、22h、33h。结果表明,20μM、10μM、60μM cilostamide都能有效的将卵母细胞抑制在GV期,40μM、60μM的抑制作用较对照组有显著提高(44.50%,48.60%vs34.67%,P<0.05),20gM较对照组有提高,但差异不显著(P>0.05)。11h、22h、33h三组GV期细胞比率分别为65.78%,48.59%,11.29%,差异极显著(P<0.01),GV期比率随着时间延长急剧下降。抑制培养后解除抑制剂后再常规培养44h,各组均能恢复减数分裂并成熟,20μM、40μM、60μM较对照组成熟率有极显著提高(61.80%,62.99%,57.69%vs53.43%,P<0.01)。11h、22h、33h三组成熟率分别为59.67%,63.98%,58.82%,较对照组53.43%都有极显著的提高(P<0.01)。第二章为研究减数分裂抑制剂cilostamide对猪卵母细胞微丝微管的影响。研究结果发现,GV期和GVBD期,微丝集中在皮质区域；Pro-MI期、MI期和AI-TI期,微丝分布在染色体周围；MII期,微丝随着极体排出细胞外,分布在极体周围。GV期和GVBD期,未观察到微管的存在；Pro-MI期,微管形成,并包裹在染色体周围；MI期,微管行成纺锤体,分布在染色体周围,可观察到垂直或者平行的状态；AI-TI期,微管仍以纺锤体形式存在,位于两团染色体中间；MII期,微管以纺锤体形式分布在染色体周围,同样可观察到垂直或者平行的状态。猪卵母细胞细胞在不同浓度cilostamide抑制培养不同时间,解除抑制培养44h,成熟的MII期卵母细胞,微丝微管形态和染色体排列与对照组无差异。Cilostamide不影响猪卵母细胞细胞骨架。第三章为探索减数分裂抑制剂cilostamide对猪体外胚胎发育潜力的影响。猪卵母细胞在含有20μM cilostamide的IVM培养液中培养22h,解除抑制剂后再常规培养44h,成熟的卵母细胞进行孤雌激活和体外受精。孤雌激活试验组卵母细胞的分裂率、囊胚率、囊胚细胞数均略高于对照组,但差异不显著(97.78%vs92.18%,40.72%vs35.09%,71.91vs64.20,P>0.05)。体外受精试验组,卵母细胞的卵裂率、囊胚率均显著高于对照组(73.10%vs68.34%,P<0.05；10.05%vs8.20%,P<0.05)；试验组的囊胚细胞数高于对照组,但差异不显著(71.91vs64.20,P>0.05)。以上实验结果表明,PDE3抑制剂cilostamide能可逆的抑制猪卵母细胞减数分裂,提高卵母细胞发育能力,对微丝微管形态和染色体排列并未产生不利影响。