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卵巢癌是女性常见的肿瘤之一，其发病率仅次于子宫癌和子宫颈癌，而列居第三位。但因卵巢癌致死者，却占各类妇科肿瘤的首位，严重威胁着女性生命健康。因此防治卵巢癌的研究正日益受到重视，而预防卵巢癌侵袭转移则是抵抗卵巢癌行之有效的治疗手段。骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）是一种多功能的胞外基质蛋白，通过与细胞表面的整合素受体αvβ3及CD44受体结合，介导肿瘤细胞的粘附、侵袭及转移。这样，骨桥蛋白在癌症发生发展和转移中的作用，就预示着OPN可能成为恶性肿瘤治疗的一个新靶点，而阻断OPN与其受体的信号传导可能为肿瘤治疗提供新的生物学依据。本研究针对OPN设计出三对siRNA，即人OPN mRNA255位点、483位点、831位点，并构建表达载体pGPU6/GFP/Neo-shOPN，同时设置阴性对照pGPU6/GFP/Neo-shNC，运用阳离子脂质体转染试剂将其转入细胞中，通过荧光显微镜观察瞬时转染效率，发现转染效率为60%。通过G418成功筛选出7个阳性克隆株。利用ELISA进行检测，发现OPN被沉默后表达下降，从而筛选出表达OPN蛋白最低的单克隆细胞株，即pGPU6/GFP/Neo-OPN1-3（M1-3细胞），此单克隆细胞为255位点构建的表达载体导入的细胞。应用细胞荧光免疫组化实验检测OPN的表达情况，结果显示OPN被沉默后红色荧光减弱，说明OPN表达下降，从而证实OPN基因沉默稳定转染细胞株构建成功。本论文通过细胞表型实验：MTT细胞增殖活力分析、软琼脂克隆形成实验、创口愈合实验、基质胶侵袭实验对7个阳性克隆株进行分析发现：实验组M1-3（pGPU6/GFP/Neo-OPN1-3）同对照组MC（HO-8910PM未处理组）相比，细胞增殖活力、克隆形成数量、转移侵袭能力均明显降低，且差异显著。说明OPN被沉默后人卵巢癌细胞的增殖侵袭转移能力减弱。因此，成功筛选出M1-3（OPN被沉默的HO-8910PM）细胞进行后续实验研究。有证据显示TLRs表达于多种肿瘤细胞表面。通过TLR4特异的激动剂细菌脂多糖LPS刺激肿瘤细胞，发现能促进肿瘤细胞转移侵袭。然而骨桥蛋白OPN亦能增强肿瘤侵袭转移，那么TLR4信号与OPN表达是否有某种联系？基于上述疑问，接着本研究通过使用TLR4特异的激动剂LPS刺激MC（HO-8910PM细胞）和M1-3（OPN被沉默的HO-8910PM细胞），通过MTT增殖活力实验、创口愈合实验、基质胶侵袭实验，结果发现：（1）实验组M1-3（OPN被敲低的HO-8910PM细胞）同对照组MC（HO-8910PM细胞）相比，细胞增殖转移及侵袭能力明显降低，说明OPN被沉默后降低了人卵巢癌HO-8910PM细胞的增殖、转移及侵袭能力。（2）MC和M1-3细胞经LPS处理6h后，与正常组（未加LPS处理组）相比，细胞转移及侵袭能力均表现出升高，且M1-3比MC细胞转移转移侵袭能力增强的程度低，说明OPN沉默能影响LPS促使的人卵巢癌细胞HO-8910PM的转移及侵袭。从而能证实LPS通过上调OPN的表达来促进HO-8910PM细胞的转移及侵袭。利用ELISA实验和细胞荧光免疫组化实验检测LPS刺激OPN基因沉默人卵巢癌的OPN表达情况，实验结果显示：（1）M1-3（OPN被沉默的细胞）比MC（HO-8910PM）OPN表达明显减少，且差异显著。（2）MC和M1-3细胞经LPS处理6h后，均比正常组（未用LPS处理）OPN表达升高，且M1-3（OPN被沉默的细胞）比MC细胞OPN表达升高的程度低。说明OPN沉默影响LPS促使的人卵巢癌细胞的OPN表达。从而证实LPS是通过上调OPN的表达来促进HO-8910PM细胞增殖、转移和侵袭，表明TLR4信号上调OPN表达可能是导致HO-8910PM转移侵袭能力增强的一个重要因素。此外，本研究为卵巢癌中针对OPN的肿瘤基因治疗提供了理论支持。