本研究目的:应用RNAi技术沉默Cyclin D1基因观察其体外对胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法:1.根据基因库上Cyclin D1的cDNA序列,设计并合成两个靶基因序列。寡核苷酸退火后插入到pGenesil-1载体中,重组质粒分别命名为pGenesil-1/C1、pGenesil-1/C2。对重组质粒进行酶切鉴定及DNA测序鉴定。同时构建了真核表达载体pGenesil-1/HK作为阴性对照。2.将重组质粒转染人胃癌细胞SGC7901,采用Western blot检测细胞中Cyclin D1蛋白的表达。3.四甲基偶氮唑盐MTT比色分析检测细胞体外增殖活力。实验结果显示:1.酶切鉴定证实Cyclin D1真核表达载体构建成功。插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。2.Western blot结果显示重组质粒显著抑制胃癌细胞中的Cyclin D1基因蛋白表达水平。3.MTT结果显示重组质粒可显著抑制胃癌细胞的体外生长。本研究应用RNAi技术沉默Cyclin D1基因在胃癌细胞SGC7901中的表达,体外证明具有明显的抗胃癌作用,为胃癌的基因治疗提供了理论依据。