【摘 要】
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【研究背景与目的】精原干细胞（SSCs）是精子发生的基础。男性一生中精原干细胞不断分裂，一部分继续增殖进行自我更新，一部分分化最终形成精子。精原干细胞移植（SSCT）指供体睾丸细胞可被移植到受体睾丸中，在那里重新构建生精功能。1994年，Ralph Brinster的实验室首次报道SSCT成功，被认为是研究生殖干细胞、支持细胞及其间相互作用的技术突破。这一技术与快速发展的冷冻保存技术、细胞长期培养
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【研究背景与目的】精原干细胞（SSCs）是精子发生的基础。男性一生中精原干细胞不断分裂，一部分继续增殖进行自我更新，一部分分化最终形成精子。精原干细胞移植（SSCT）指供体睾丸细胞可被移植到受体睾丸中，在那里重新构建生精功能。1994年，Ralph Brinster的实验室首次报道SSCT成功，被认为是研究生殖干细胞、支持细胞及其间相互作用的技术突破。这一技术与快速发展的冷冻保存技术、细胞长期培养技术和干细胞富集技术相结合，不久将带来更多技术的突破。SSCT为基础科学、人类医学、家畜和野生动物繁殖领域中的理论研究和实践应用提供了金光大道。SSCT的应用前景是：①将能育男性的SSC移植到不育男性的生精小管内，可恢复不育男性的生精功能，使供体生精细胞分化为精子。②可为即将进行化疗和放疗的男性患者提供生育力的保护。③SSCs可望成为防止先天缺陷引起的致死性或高危性疾病以及进行生殖细胞基因治疗的工具。④是研究精子发生机制的有力手段。⑤非常有用于经济动物生精细胞系的保存。 本研究中，红色荧光蛋白（DsRed2）基因经脂质体介导分别在体外和体内转染供体鼠的精原干细胞。DsRed2转染的精原干细胞经分离、提纯后，被移植到用白消安处理破坏其内源性生精的受体鼠生精小管中，受体鼠的睾丸和副睾分别在移植后6周和10周被切除，制备冰冻切片分别在荧光显微镜和光学显微镜下观察，研究携带外源基因的供体SSCs移植后在受体睾丸中的行为。 【材料与方法】1)材料①pDsRed2-N1质粒；②脂质体DOSPER；③小鼠精原细胞：取自7～8天的新生昆明小白鼠。2)方法①体外转染：分离纯化新生小鼠的精原细胞，用DOSPER介导法将pDsRed2-N1质粒导入精原细胞，体外培养48～56h。体内转染：将含有DOSPER／DNA复合物的转染液直接注射到新生小鼠体内睾丸内，24h后分离纯化精原细胞，在体外培养24h。②荧光显微镜观察并拍照片，计数后计算DsRed2的表达效率；③将体外分离纯化并转染后的精原细胞，移植到白消安破坏其内源性生精的受体小鼠睾丸内；④移植6周和10周后分别切取受体鼠睾丸及附睾，制作冰冻切片，在荧光显微镜下观察并拍片，然后用苏木精伊红染色，在相同位置拍摄光镜片。 【结果】体外转染精原细胞后DsRed2的表达效率是20％，体内转染的表达效率是8％。移植后6周，睾丸切片上可见散在分布的表达红色荧光蛋白的精原细胞，说明供者来源的细胞已在受体曲细精管基底膜定居。移植后10周的睾丸切片上可见阳性细
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